人巨细胞病毒Han 株US12 基因缺失株的构建及其在人胚肺成纤维细胞中的复制
人巨细胞病毒Han 株US12 基因缺失株的构建及其在人胚肺成纤维细胞中的复制
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DOI：
10.12007/j.issn.0258
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发表时间：
2017
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
阮强
中科院分区：
文献类型：
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作者：
卢颖;马艳萍;柳中洋;王鸿雁;齐莹;韩丽英;高爽;郑博;刘畅;黄郁晶;阮强
目的 构建人巨细胞病毒（HCMV）Han株US12 基因缺失的BAC毒株，研究US12产物对HCMV Han株在人胚肺成纤维细胞（HELF）中复制的影响。方法以侧翼含有US12 基因同源序列的PCR引物扩增卡那霉素抗性基因，电转至含有Han株BAC质粒的大肠杆菌DY380⁃Han⁃wt⁃BAC，PCR及DNA测序验证US12 缺失的病毒序列。将缺失突变质粒Han⁃ΔUS12⁃BAC⁃P电转至HELF，获得感染性病毒颗粒Han⁃ΔUS12⁃BAC。以MOI 为0.1 的Han⁃ΔUS12⁃BAC 毒株及Han⁃wt ⁃BAC 毒株感染HELF，TCID50法测定上清中病毒滴度，绘制病毒增殖曲线。结果成功构建了Han⁃ΔUS12⁃BAC克隆，转染HELF后成功获得感染性病毒。生长曲线实验结果表明，ΔUS12缺失和野生型毒株在HELF中复制增殖与扩散水平无明显差异。结论US12 为HCMV临床株Han在HELF中增殖和扩散过程中的非必需基因。