慢病毒介导的 TPX2基因沉默 对人宫颈癌HeLa 细胞系增殖、迁移 和细胞周期的 影响及机制
慢病毒介导的 TPX2基因沉默 对人宫颈癌HeLa 细胞系增殖、迁移 和细胞周期的 影响及机制
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DOI：
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发表时间：
2017
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
郑健
中科院分区：
文献类型：
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作者：
宋淑芳;常海平;杨彩荣;赵荣伟;张龙;任杰;郑健
[摘要].目的: 研究慢病毒介导的TPX2基因沉默对人宫颈癌HeLa细胞系增殖、周期及迁移的影响及其机制。方法: 构建靶向TPX2基因的TPX2-shRNA慢病毒表达载体（LV-TPX2-shRNA-1~ 4），同时构建阴性对照质粒（TPX2-NC-shRNA），将5种质粒分别转染到293T细胞中制备慢病毒。慢病毒感染宫颈癌HeLa细胞后，实时荧光定量PCR和Western blot分别检测TPX2 mRNA和蛋白的沉默效果。选择沉默效果最佳的重组慢病毒进行后续功能实验。分别采用 CCK-8法、Transwell迁移实验及流式细胞仪检测各组细胞的增殖、迁移及细胞周期分布情况。Western blot检测TPX2-shRNA转染前后Ki-67、Aurora-A、Cyclin B1及P53的表达。结果:与对照组比较，构建的靶向TPX2基因的RNA干扰慢病毒载体均可持续稳定的抑制HeLa细胞TPX2基因的表达，尤其LV-TPX2-shRNA-1最为明显(P＜0.01)，遂选择LV-TPX2-shRNA-1进行后续实验。沉默TPX2基因的表达能降低hela细胞增殖及迁移能力（P＜0.05）；能使G2及S期细胞增加（P＜0.05）；上调P53的表达水平，下调cyclinB2、Ki-67及AuroraA的表达水平,（P均＜0.05）。结论：沉默TPX2表达能抑制宫颈癌细胞的增殖及迁移能力，可能与其改变细胞周期分布及下调Ki-67、Aurora-A、Cyclin B1蛋白表达水平，上调P53蛋白表达水平有关。