重组缩短的葡萄球菌类肠毒素X蛋白克隆表达及催吐活性评价
重组缩短的葡萄球菌类肠毒素X蛋白克隆表达及催吐活性评价
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DOI：
10.3760/cma.j.cn112338-20191010-00724
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发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
闫笑梅
中科院分区：
文献类型：
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作者：
王铜;陶晓霞;孟凡亮;李心朋;小野久弥;王多;胡东良;张建中;王国庆;闫笑梅
目的分析缩短的葡萄球菌类肠毒素X(truncated Staphylococcal enterotoxin-like toxin X,tSElX)氨基酸多态性,对其进行克隆表达纯化并对催吐活性进行评价。方法将tselx序列与本课题组前期完成测序的145株CC398菌株基因组序列及NCBI数据库进行比对分析。设计引物扩增tselx目的基因,将该片段重组于pMD18-T载体中并进行测序鉴定。经限制性内切酶BamH I和EcoR I双酶切后将目的片段构建于质粒pGEX-6P-l及pET-28a(+)中,重组质粒鉴定后,IPTG诱导蛋白表达。将以包涵体形式表达的蛋白进行变性和复性,用亲和层析法和超滤法对表达产物进行纯化。将纯化的tSElX蛋白以250 µg/kg喂饲普通狨猴,观察呕吐反应。结果tselx基因在我国不同来源(患者、健康人群和动物)的145株CC398菌株均存在。我国菌株编码蛋白的氨基酸序列同源性为100.0%,与4株美国菌株的同源性分别为97.8%(1株)和98.9%(3株)。通过两套表达系统及不同诱导条件,tSElX均以包涵体形式表达。通过变性及复性,获得高纯度的可溶性重组蛋白tSElX。在250 µg/kg剂量下tSElX蛋白不能引起普通狨猴的呕吐反应。结论tSElX氨基酸序列在CC398菌株中普遍存在,且具有一定保守性。高纯度的可溶性tSElX重组蛋白在250 µg/kg剂量下不具有普通狨猴催吐活性。