Nanosecond electric pulse effects on gene expression.
Nanosecond electric pulse effects on gene expression.
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纳米电脉冲对基因表达的影响。
DOI：
10.1007/s00232-013-9579-y
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发表时间：
2013-11
影响因子：
2.4
通讯作者：
Miklavcic, Damijan
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chopinet, Louise;Batista-Napotnik, Tina;Montigny, Audrey;Rebersek, Matej;Teissie, Justin;Rols, Marie-Pierre;Miklavcic, Damijan
使用微或毫秒电脉冲的基因电转染是安全基因转移的成熟方法。为了有效转染，质粒DNA必须到达细胞核。较短的高强度纳秒电脉冲（nsEP）影响细胞内膜，并可能有助于增加细胞核对质粒的摄取。在我们的研究中，nsEP应用于中国仓鼠卵巢（CHO）细胞后，经典的基因电转移，使用微或毫秒脉冲与质粒编码的绿色荧光蛋白（GFP）。经典基因电转移和nsEP之间的时间间隔是不同的（0.5，2，6和24小时），并使用三种不同的nsEP参数：18 ns-10 kV/cm，10 ns-40 kV/cm和15 ns-60 kV/cm。通过荧光显微镜或流式细胞术分析的结果表明，电转染细胞的百分比和GFP表达量均未被nsEP增加。所有nsEP参数也对具有GFP组成型表达的人结直肠肿瘤细胞（HCT-116）的GFP荧光强度没有影响。因此，我们得出结论，nsEP在CHO细胞中的基因电转移没有重大贡献，HCT-116细胞中的组成型GFP表达没有影响。
Gene electrotransfection using micro- or millisecond electric pulses is a well-established method for safe gene transfer. For efficient transfection, plasmid DNA has to reach the nucleus. Shorter, high-intensity nanosecond electric pulses (nsEPs) affect internal cell membranes and may contribute to an increased uptake of plasmid by the nucleus. In our study, nsEPs were applied to Chinese hamster ovary (CHO) cells after classical gene electrotransfer, using micro- or millisecond pulses with a plasmid coding the green fluorescent protein (GFP). Time gaps between classical gene electrotransfer and nsEPs were varied (0.5, 2, 6 and 24 h) and three different nsEP parameters were used: 18 ns-10 kV/cm, 10 ns-40 kV/cm and 15 ns-60 kV/cm. Results analyzed by either fluorescence microscopy or flow cytometry showed that neither the percentage of electrotransfected cells nor the amount of GFP expressed was increased by nsEP. All nsEP parameters also had no effects on GFP fluorescence intensity of human colorectal tumor cells (HCT-116) with constitutive expression of GFP. We thus conclude that nsEPs have no major contribution to gene electrotransfer in CHO cells and no effect on constitutive GFP expression in HCT-116 cells.
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