Membrane topology of bovine adrenocortical cytochrome P-450C21: structural studies by trypsin digestion in vesicle membranes.
Membrane topology of bovine adrenocortical cytochrome P-450C21: structural studies by trypsin digestion in vesicle membranes.
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牛肾上腺皮质细胞色素 P-450C21 的膜拓扑：通过胰蛋白酶消化囊泡膜进行结构研究。
DOI：
10.1021/bi00210a048
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发表时间：
1993
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
S. Takemori
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
S. Kominami;H. Tagashira;Y. Ohta;M. Yamada;S. Kawato;S. Takemori
将纯化的肾上腺皮质微粒体P-450 C21掺入由磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰丝氨酸以5：3：1的摩尔比组成的囊泡膜中。胰蛋白酶水解的P-450 C21导致30-，25-和20-kDa的片段的形成。用抗P-450 C21 IgG进行Western印迹，通过牛肾上腺皮质微粒体的胰蛋白酶解观察到类似的片段形成。在洗涤剂溶解状态下，胰蛋白酶将P-450 C21切割成非常小的肽。用500 mM Na 2CO 3洗涤胰蛋白酶处理的囊泡未能使这些片段与膜分离。N-末端氨基酸序列分析表明，胰蛋白酶能切割P-450 C21的267 Arg-268 Val和332 Arg-333 Val键。片段形成的时间过程表明，胰蛋白酶首先裂解267 Arg-268 Val键，产生30-和25-kDa片段，随后裂解25-kDa片段中的332 Arg-333 Val键，产生20-kDa片段。无论是21-羟化酶活性，还原CO差谱，也不是EPR谱消化P-450 C21不同于那些未消化的P-450 C21。当底物孕酮存在时，在50 ℃下热处理20分钟不会引起消化的P-450 C21活性的任何降低。在增溶状态下没有观察到这种对热处理的高稳定性。对P-450 C21的旋转扩散实验表明，消化后保持血红素的分子的大小没有显着变化。在这些结果的基础上，P-450 C21被认为是深深嵌入囊泡膜。
Purified adrenocortical microsomal P-450C21 was incorporated into vesicle membranes composed of phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, and phosphatidylserine at a molar ratio of 5:3:1. Trypsinolysis of the incorporated P-450C21 resulted in the formation of 30-, 25-, and 20-kDa fragments. Similar fragment formation was observed by trypsinolysis of bovine adrenocortical microsomes with Western blotting using anti-P-450C21 IgG. In the detergent-solubilized state, trypsin cleaved P-450C21 into very small peptides. Washing of the trypsin-treated vesicles with 500 mM Na2CO3 failed to cause these fragments to separate from membranes. N-Terminal amino acid sequencing of these fragments showed that trypsin cleaved the 267 Arg-268Val and 332Arg-333Val bonds of P-450C21. The time course of fragment formation indicated that trypsin cleaved the 267Arg-268Val bond first to produce 30- and 25-kDa fragments and subsequently the 332Arg-333Val bond in the 25-kDa fragment to produce the 20-kDa fragment. Neither 21-hydroxylase activity, the reduced CO difference spectrum, nor the EPR spectrum of digested P-450C21 differed from those of undigested P-450C21. Heat treatment at 50 degrees C for 20 min did not cause any decrease in activity of digested P-450C21, when the substrate progesterone was present. This high stability toward heat treatment was not observed in the solubilized state. Rotational diffusion experiments on P-450C21 showed that the size of the molecule holding the heme was not changed significantly after digestion. On the basis of these results, P-450C21 is concluded to be deeply embedded in the vesicle membranes.
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人细胞色素 P-450(17 α) N 末端区域苯丙氨酸的缺失会导致 17 α-羟化酶/17,20-裂解酶的部分组合缺陷。
DOI：
--
发表时间：
1989
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Yanase,T;Kagimoto,M;Suzuki,S;Hashiba,K;Simpson,ER;Waterman,MR
通讯作者：
Waterman,MR
DOI：
10.1016/s0021-9258(18)89040-8
发表时间：
1985-05
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
J. Ozols;F. S. Heinemann;E. F. Johnson
通讯作者：
J. Ozols;F. S. Heinemann;E. F. Johnson
影响因子：
5.6
作者：
POULOS, TL;FINZEL, BC;HOWARD, AJ
通讯作者：
HOWARD, AJ
来自兔肝微粒体的苯巴比妥诱导的细胞色素 P-450（同工酶 2）的完整氨基酸序列和预测的膜拓扑结构。
DOI：
10.1073/pnas.80.21.6552
发表时间：
1983
影响因子：
11.1
作者：
Tarr,GE;Black,SD;Fujita,VS;Coon,MJ
通讯作者：
Coon,MJ
DOI：
--
发表时间：
1985-12
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
T. Poulos;Barry C. FinzelSY;Irwin C. Gunsalusll;G. Wagner;J. Kraut
通讯作者：
T. Poulos;Barry C. FinzelSY;Irwin C. Gunsalusll;G. Wagner;J. Kraut