TMPRSS2 and SARS-CoV-2 SPIKE interaction assay for uHTS.
TMPRSS2 and SARS-CoV-2 SPIKE interaction assay for uHTS.
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DOI：
10.1093/jmcb/mjad017
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发表时间：
2023-08-03
影响因子：
5.5
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
导致COVID-19疾病的冠状病毒SARS-CoV-2在过去两年中夺走了数百万人的生命。这就要求快速开发针对病毒复制周期各个阶段的有效治疗剂。宿主跨膜丝氨酸蛋白酶2 （TMPRSS2）与病毒SPIKE蛋白之间的相互作用是SARS-CoV-2感染的重要初始步骤，为开发治疗性病毒进入抑制剂提供了机会。在这里，我们报告了一种时间分辨荧光/Förster共振能量转移（TR-FRET）试验的发展，用于监测共表达这些蛋白的细胞裂解物中的TMPRSS2-SPIKE相互作用。该检测配置为384孔板格式，用于高通量筛选，具有强大的检测性能。为了实现大规模的化合物筛选，我们进一步将该检测方法缩小为1536孔超高通量筛选（uHTS）格式。初步筛选表明该方法可用于uHTS。我们优化的TR-FRET uHTS试验为扩大筛选活动提供了一个有利的平台，以发现针对SPIKE和TMPRSS2蛋白-蛋白相互作用的新型小分子抑制剂。
SARS-CoV-2, the coronavirus that causes the disease COVID-19, has claimed millions of lives over the past 2 years. This demands rapid development of effective therapeutic agents that target various phases of the viral replication cycle. The interaction between host transmembrane serine protease 2 (TMPRSS2) and viral SPIKE protein is an important initial step in SARS-CoV-2 infection, offering an opportunity for therapeutic development of viral entry inhibitors. Here, we report the development of a time-resolved fluorescence/Förster resonance energy transfer (TR-FRET) assay for monitoring the TMPRSS2–SPIKE interaction in lysate from cells co-expressing these proteins. The assay was configured in a 384-well-plate format for high-throughput screening with robust assay performance. To enable large-scale compound screening, we further miniaturized the assay into 1536-well ultrahigh-throughput screening (uHTS) format. A pilot screen demonstrated the utilization of the assay for uHTS. Our optimized TR-FRET uHTS assay provides an enabling platform for expanded screening campaigns to discover new classes of small-molecule inhibitors that target the SPIKE and TMPRSS2 protein–protein interaction.
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影响因子：
16.6
作者：
Li Z;Ivanov AA;Su R;Gonzalez-Pecchi V;Qi Q;Liu S;Webber P;McMillan E;Rusnak L;Pham C;Chen X;Mo X;Revennaugh B;Zhou W;Marcus A;Harati S;Chen X;Johns MA;White MA;Moreno C;Cooper LA;Du Y;Khuri FR;Fu H
通讯作者：
Fu H
SARS-COV-2峰值的氟蛋白切割会促进，但对于感染和细胞融合并不是必不可少的。
影响因子：
6.7
作者：
Papa G;Mallery DL;Albecka A;Welch LG;Cattin-Ortolá J;Luptak J;Paul D;McMahon HT;Goodfellow IG;Carter A;Munro S;James LC
通讯作者：
James LC
影响因子：
1.8
作者：
Xiong, Jinglin;Pecchi, Valentina Gonzalez;Du, Yuhong
通讯作者：
Du, Yuhong
DOI：
10.1056/nejmoa2118542
发表时间：
2022-04-14
期刊：
The New England journal of medicine
影响因子：
--
作者：
Hammond J;Leister-Tebbe H;Gardner A;Abreu P;Bao W;Wisemandle W;Baniecki M;Hendrick VM;Damle B;Simón-Campos A;Pypstra R;Rusnak JM;EPIC-HR Investigators
通讯作者：
EPIC-HR Investigators
影响因子：
3.6
作者：
Mo, Xiulei;Qi, Qi;Fu, Haian
通讯作者：
Fu, Haian