Optimized protocol for derivation of human embryonic stem cell lines.
Optimized protocol for derivation of human embryonic stem cell lines.
复制标题
用于衍生人类胚胎干细胞系的优化方案。
DOI：
10.1007/s12015-012-9377-4
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发表时间：
2012
影响因子：
4.8
通讯作者：
Camarasa MV
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Camarasa MV
在过去的12年里，人类胚胎干细胞（hESCs）的生物学和应用受到了科学界的极大关注。由J. Thomson的小组获得的第一个hESC系的衍生物（Science 282（5391）：1145-1147，1998）已经用于脊髓损伤患者的临床试验，并且其他hESC系现在已经用于产生用于治疗失明的细胞（Lancet 379（9817）：713-720，2012）。除了使用开放培养方法的基于小鼠或人饲养层的经典方案之外，（体外细胞和发育生物学-动物46（3-4）：386-394，2010;干细胞23（9）：1221-1227，2005;自然生物技术24（2）：185-187，2006;人类生殖21（2）：503-511，2006;人类生殖20（8）：2201-2206，2005;生育力和不育性83（5）：1517-1529，2005），新的hESC系已经衍生为无异种（不使用动物来源的试剂）（PLoS One 5（4）：1024-1026，2010）、无饲养层（不具有支持细胞单层）（Lancet 365（9471）：1601-1603，2005）、在油下微滴中（In Vitro Cellular & Developmental Biology - Animal 46（3-4）：236-41，2010）和在具有ROCK抑制剂的悬浮液中（Nature Biotechnology 28（4）：361-4，2010）。无论培养系统如何，成功的hESC衍生通常需要优化胚胎培养，仔细及时地分离其内细胞团（ICM），以及精确的培养条件，直到在hESC系衍生期间建立多能细胞生长。在这里，我们解决的关键步骤的人胚胎干细胞系衍生协议，并提供提示，以应用质量控制的每一步的程序。
For the past 12 years, the biology and applications of human embryonic stem cells (hESCs) have received great attention from the scientific community. Derivatives of the first hESC line obtained by J. Thomson’s group (Science 282(5391):1145–1147, 1998) have been used in clinical trials in patients with spinal cord injury, and other hESC lines have now been used to generate cells for use in treating blindness (Lancet 379(9817):713–720, 2012). In addition to the classical protocol based on mouse or human feeder layers using open culture methods (In Vitro Cellular & Developmental Biology - Animal 46(3–4):386–394, 2010; Stem Cells 23(9):1221–1227, 2005; Nature Biotechnology 24(2):185–187, 2006; Human Reproduction 21(2):503–511, 2006; Human Reproduction 20(8):2201–2206, 2005; Fertility and Sterility 83(5):1517–1529, 2005), novel hESC lines have been derived xeno-free (without using animal derived reagents) (PLoS One 5 (4):1024–1026, 2010), feeder-free (without supporting cell monolayers) (Lancet 365(9471):1601–1603, 2005), in microdrops under oil (In Vitro Cellular & Developmental Biology - Animal 46(3–4):236–41, 2010) and in suspension with ROCK inhibitor (Nature Biotechnology 28(4):361–4, 2010). Regardless of the culture system, successful hESC derivation usually requires optimization of embryo culture, the careful and timely isolation of its inner cell mass (ICM), and precise culture conditions up to the establishment of pluripotent cell growth during hESC line derivation. Herein we address the crucial steps of the hESC line derivation protocol, and provide tips to apply quality control to each step of the procedure.