Asymmetric nature of two subunits of RAD18, a RING-type ubiquitin ligase E3, in the human RAD6A-RAD18 ternary complex.
Asymmetric nature of two subunits of RAD18, a RING-type ubiquitin ligase E3, in the human RAD6A-RAD18 ternary complex.
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DOI：
10.1093/nar/gkr805
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发表时间：
2012-02
影响因子：
14.9
通讯作者：
Kamiya K
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Masuda Y;Suzuki M;Kawai H;Suzuki F;Kamiya K
RAD 18是一种在复制后修复中起重要作用的RING型泛素连接酶（E3），具有命名为RING、UBZ、SAP的不同结构域和RAD 6结合结构域（R6 BD），并形成二聚体。RAD 6是一种泛素结合酶（E2），与R6 BD在C-末端部分稳定结合。在本研究中，我们建立了一种方法来区分两个亚基的RAD 18通过引入不同的标签，并分析了突变体复合物。令人惊讶的是，我们的结果表明，RAD 6A和RAD 18形成三元复合物RAD 6A-（RAD 18）2，并且在两个RAD 18亚基中仅存在一个R6 BD就足以形成三元复合物和具有连接酶活性。有趣的是，缺乏两个R6 BD的突变体二聚体的连接酶活性即使在溶液中加入大量的RAD 6A也没有恢复，这表明需要通过与R6 BD的相互作用进行精确的并置。我们进一步表明，无论是环或SAP，但不是UBZ的两个亚基的突变，强烈降低连接酶的活性，虽然在两个亚基中只有一个失活是没有影响的。这些结果表明复合物中两个RAD 18亚基的不对称性质。
RAD18, a RING-type ubiquitin ligase (E3) that plays an essential role in post-replication repair, possesses distinct domains named RING, UBZ, SAP and the RAD6-binding domain (R6BD) and forms a dimer. RAD6, an ubiquitin-conjugating enzyme (E2), stably associates with R6BD in the C-terminal portion. In this study, we established a method to distinguish between the two subunits of RAD18 by introduction of different tags, and analyzed mutant complexes. Our results, surprisingly, demonstrate that RAD6A and RAD18 form a ternary complex, RAD6A–(RAD18)2 and the presence of only one R6BD in the two RAD18 subunits is sufficient for ternary complex formation and the ligase activity. Interestingly, ligase activity of a mutant dimer lacking both R6BDs is not restored even with large amounts of RAD6A added in solution, suggesting a requirement for precise juxtaposition via interaction with R6BD. We further show that mutations in both subunits of either RING or SAP, but not UBZ, strongly reduce ligase activity, although inactivation in only one of two subunits is without effect. These results suggest an asymmetric nature of the two RAD18 subunits in the complex.
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影响因子：
4.8
作者：
Hashizume, R;Fukuda, M;Ohta, T
通讯作者：
Ohta, T
DOI：
10.1073/pnas.0505949102
发表时间：
2005-12-20
影响因子：
11.1
作者：
Garg, P;Burgers, PM
通讯作者：
Burgers, PM
影响因子：
4.8
作者：
Ahn, JS;Whitby, MC
通讯作者：
Whitby, MC
RAD18 传递 DNA 损伤信号以引发同源重组修复。
影响因子：
21.3
作者：
Huang, Jun;Huen, Michael S. Y.;Kim, Hongtae;Leung, Charles Chung Yun;Glover, J. N. Mark;Yu, Xiaochun;Chen, Junjie
通讯作者：
Chen, Junjie
影响因子：
4.8
作者：
Bish, Rebecca A.;Myers, Michael P.
通讯作者：
Myers, Michael P.