肠炎沙门菌spvD基因缺失与回补株的构建及其对Caco-2细胞毒力的研究
肠炎沙门菌spvD基因缺失与回补株的构建及其对Caco-2细胞毒力的研究
复制标题
DOI：
10.3760/cma.j.cn112150-20211120-01073
复制
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
刘洁
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
侯悦;逄波;李哲;赵强;刘洁
目的探讨肠炎沙门菌spvD基因对人克隆结肠腺癌Caco-2细胞侵袭力及胞内增殖力的影响。方法利用自杀质粒介导的同源重组技术构建spvD基因缺失株,PCR扩增并克隆spvD基因于pBAD33表达载体获得回补质粒,导入相应缺失株得到回补株,并将pBAD33导入野生株及缺失株作为空载对照。荧光定量反转录聚合酶链式反应检测.spvD mRNA表达水平。以Caco-2细胞作为体外模拟人肠上皮细胞模型,分别将野生株、缺失株及回补株与其共培养,探究spvD基因对Caco-2细胞的毒力。使用LSD-t检验进行3组间spvD mRNA表达水平比较及胞内活菌数比较,使用χ~2检验进行3组间侵袭率的比较。结果以野生株spvD mRNA表达量作为单位"1",缺失株为"0.00"、回补株为"2.60" (LSD-t_(野生株,缺失株)=1.11,P=0.31;LSD-t_(野生株,回补株)=-1.77,P=0.13;LSD-t_(缺失株,回补株)=-2.88,P=0.03),该结果证实了缺失株及回补株的成功构建。上述3组肠炎沙门菌对Caco-2细胞的侵袭实验结果显示,野生株侵袭率为0.23%,缺失株侵袭率为0.16%,回补株侵袭率为0.16%,差异无统计学意义(χ~2=1.13,P=0.570)。通过比较细菌干预Caco-2细胞后不同时间点胞内活菌数,发现在干预16h时,野生株(6.50×10~6CFU/ml)、回补株(7.25×10~6CFU/ml)胞内活菌数明显增多,均高于缺失株(1.90×10~6CFU/ml) (LSD-t_(野生株,缺失株)=7.95,P=0.00;LSD-t_(野生株,回补株)=-1.27,P=0.25;LSD-t_(缺失株,回补株)=-9.22,P=0.00)。结论尚不能认为spvD基因影响肠炎沙门菌对Caco-2细胞的侵袭力,但该基因可促进肠炎沙门菌在Caco-2细胞内增殖。