Alanyl‐phosphatidylglycerol synthase: mechanism of substrate recognition during tRNA‐dependent lipid modification in Pseudomonas aeruginosa
Alanyl‐phosphatidylglycerol synthase: mechanism of substrate recognition during tRNA‐dependent lipid modification in Pseudomonas aeruginosa
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丙氨酰磷脂酰甘油合酶：铜绿假单胞菌 tRNA 依赖性脂质修饰过程中底物识别的机制
DOI：
10.1111/j.1365-2958.2011.07621.x
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发表时间：
2011
影响因子：
3.6
通讯作者：
Tiefenau
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hebecker;Arendt;Heinemann;Tiefenau
细菌的脂质稳态对于适应不断变化的环境和在抗菌治疗的条件下起着重要作用。氨酰磷脂酰甘油脱氢酶催化的磷脂磷脂酰甘油的tRNA依赖性氨酰化显示出使各种生物体对抗菌剂不太敏感。因此，这种类型的酶可能提供一个新的目标，以加强现有的抗菌剂的功效。本研究利用铜绿假单胞菌丙氨酰磷脂酰甘油合成酶来鉴定这种跨膜蛋白的最小核心结构域，该结构域能够进行丙氨酰磷脂酰甘油的生物合成。使用该催化片段，我们建立了一个可靠的活性测定，用于研究酶的机制，通过分析的33个突变体蛋白在体外。底物识别进行了分析，通过使用氨酰化微螺旋作为天然tRNA底物的类似物。这种酶甚至可以耐受这种最小底物的突变形式，这表明无论是完整的tRNA还是受体茎的单个序列都不是底物识别的决定因素。此外，对磷脂酰甘油衍生物的分析表明，磷脂的极性头部基团被酶特异性识别，而单个脂肪酸的修饰或甚至单个脂肪酸的缺失并不能消除A-PG合成。
Bacterial lipid homeostasis plays an important role for the adaptation to changing environments and under conditions of antimicrobial treatment. The tRNA‐dependent aminoacylation of the phospholipid phosphatidylglycerol catalysed by aminoacyl‐phosphatidylglycerol synthases was shown to render various organisms less susceptible to antibacterial agents. Therefore, this type of enzyme might provide a new target to potentiate the efficacy of existing antimicrobials. This study makes use of thePseudomonas aeruginosaalanyl‐phosphatidylglycerol synthase to identify the minimal core domain of this transmembrane protein, which is capable of alanyl‐phosphatidylglycerol biosynthesis. Using this catalytic fragment we established a reliable activity assay that was used to study the enzymatic mechanism by analysing an overall of 33 mutant proteinsin vitro. Substrate recognition was analysed by using aminoacylated microhelices as analogues of the natural tRNA substrate. The enzyme even tolerated mutated versions of this minimal substrate, which indicates that neither the intact tRNA, nor the individual sequence of the acceptor stem is a determinant for substrate recognition. Furthermore, the analysis of derivatives of phosphatidylglycerol indicated that the polar head group of the phospholipid is specifically recognized by the enzyme, whereas modification of an individual fatty acid or even the deletion of a single fatty acid did not abolish A‐PG synthesis.
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磷脂酰甘油氨酰衍生物的生物合成。
DOI：
--
发表时间：
1967
期刊：
Biochemical and Biophysical Research Communications - BBRC
影响因子：
--
作者：
R. Gould;W. Lennarz
通讯作者：
W. Lennarz
铜绿假单胞菌的可提取脂质。
DOI：
--
发表时间：
1969
期刊：
Biochimica et Biophysica Acta
影响因子：
--
作者：
I. Hancock;P. Meadow
通讯作者：
P. Meadow
关于细菌磷脂酰甘油的氨基酸酯。
DOI：
--
发表时间：
1965
期刊：
Biochimica et Biophysica Acta
影响因子：
--
作者：
U. Houtsmuller;L. van Deenen
通讯作者：
L. van Deenen
DOI：
10.1073/pnas.85.4.1033
发表时间：
1988-02-01
影响因子：
11.1
作者：
SAMPSON, JR;UHLENBECK, OC
通讯作者：
UHLENBECK, OC
野生型 RNA MicrohelixAla 和 3:70 变体：局部螺旋结构和紧密结合水的分子动力学分析
DOI：
--
发表时间：
1999
期刊：
影响因子：
--
作者：
Maria C. Nagan;Stephanie S. Kerimo;K. Musier;C. Cramer
通讯作者：
C. Cramer