Pertussis toxin effects on chemoattractant-induced response heterogeneity in human PMNs utilizing Fluo-3 and flow cytometry.
Pertussis toxin effects on chemoattractant-induced response heterogeneity in human PMNs utilizing Fluo-3 and flow cytometry.
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利用 Fluo-3 和流式细胞术研究百日咳毒素对人类 PMN 中化学引诱剂诱导的反应异质性的影响。
DOI：
10.1002/cyto.990120308
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发表时间：
1991
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Harter,JM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Omann,GM;Harter,JM
采用流式细胞术方法测定人多形核白细胞（PMN）中N-甲酰肽诱导的胞浆钙水平，使用钙指示剂Fluo-3检测。Fluo-3很容易作为乙酰氧基甲酯加载到PMN中。在室温下，Fluo-3挤出在2小时内最小（<10%）。流式细胞术直方图产生对称分布，表明均匀标记的细胞。用N-甲酰基-甲基-亮氨酸（FMLP）刺激细胞引起所有细胞的均匀活化，如荧光分布向更高荧光水平的偏移所示，同时仍保持对称分布。静息值或FMLP诱导的细胞溶质钙水平在加载超过20倍范围的Fluo-3-乙酰氧基甲酯的细胞中相似。通过将细胞与不同浓度的百日咳毒素孵育一段时间来确定分级百日咳毒素（PT）处理对钙应答的影响，所述时间段在细胞内产生一系列ADP核糖分离水平。当这些细胞用FMLP激活时，荧光直方图显示百日咳毒素处理导致细胞从应答者转化为无应答者。响应细胞响应与最大钙升高类似的控制。这种行为可能反映了PT的A-原聚体的异质插入，或者反应所需的偶联G-蛋白的非常尖锐的阈值。
Flow cytometric methods were utilized to determine N‐formylpeptide‐induced cytosolic calcium levels in human polymorphonuclear leukocytes (PMNs) detected with the calcium indicator Fluo‐3. Fluo‐3 was readily loaded into PMNs as the acetoxymethyl ester. At room temperature Fluo‐3 extrusion was minimal (<10%) over a 2 h time period. Flow cytometric histograms yielded symmetric distributions indicating homogeneous labelling of the cells. Stimulation of the cells with N‐formyl‐met‐leu‐phe (FMLP) caused homogeneous activation of all cells as indicated by a shift of the fluorescence distribution to higher fluorescence levels while still maintaining a symmetrical distribution. Resting values or FMLP‐induced cytosolic calcium levels were similar in cells loaded over a 20‐fold range of Fluo‐3‐acetoxymethyl ester. The effect of graded pertussis toxin (PT) treatment on the calcium response was determined by incubating cells with different concentrations of pertussis toxin for a time period that yielded a range of ADP ribosolation levels inside the cells. When these cells were activated with FMLP, the fluorescence histograms showed that pertussis toxin treatment resulted in a conversion of cells from responders to nonresponders. The responding cells responded with maximum calcium elevations similar to controls. This behavior may reflect heterogeneous insertion of the A‐protomer of PT or a very sharp threshold of coupled G‐proteins required to transduce the responses.
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