结核分枝杆菌KatG -ACT271CCT(Thr271Pro)突变与异烟肼耐药关系的研究
结核分枝杆菌KatG -ACT271CCT(Thr271Pro)突变与异烟肼耐药关系的研究
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发表时间：
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期刊：
影响因子：
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通讯作者：
袁小亮
中科院分区：
文献类型：
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作者：
杨寿慧;刘惟优;吴龙火;袁小亮
摘 要：目的 探讨结核分枝杆菌katG ACT271CCT（Thr271Pro）基因点突变对异烟肼耐药性的影响。方法 应用基因克隆技术合成野生型katG、突变型katG(AGC315ACC)和katG(ACT271CCT)基因片段，分别重组至质粒pET22b(+)，转入表达菌BL21（DE3）pLySs，IPTG诱导目的蛋白表达，亲和层析法对目的蛋白分离纯化。最终检测重组katG蛋白过氧化物酶及过氧化氢酶活性。此外，通过软件AutoDock4.0采用半柔性对接方式分别模拟野生型katG蛋白、Thr271Pro突变型katG蛋白与异烟肼相互作用。结果 成功获得纯化katG重组蛋白。相比野生型katG蛋白（过氧化氢酶活性361.5 U/mg和过氧化物酶活性77.6 U/mg），Thr271Pro突变型katG蛋白过氧化氢酶和过氧化物酶活性分别下降56%和63%（158.8 U/mg和28.7 U/mg），而Ser315Thr突变型katG蛋白过氧化氢酶和过氧化物酶活性分别下降74%和75%（96.2 U/mg和19.7 U/mg）。分子对接结果提示，异烟肼与Thr271Pro突变型KatG蛋白结合自由能较野生型升高，Thr271Pro突变蛋白与异烟肼结合的亲和性降低。271位氨基酸突变后， Thr271Pro突变型katG蛋白氧化反应活性空腔发生一定的变形。结论 katG Thr271Pro基因突变引起katG蛋白酶活性部分缺失和氧化反应活性空腔发生变形，导致异烟肼耐药。