荧光三维重建技术在细粒棘球蚴结构解析中的应用
荧光三维重建技术在细粒棘球蚴结构解析中的应用
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DOI：
10.13350/j.cjpb.210610
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发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
林仁勇
中科院分区：
文献类型：
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作者：
杨宁;闫怡;毕晓娟;刘辉;房彬彬;孙立;楚瑨;吕国栋;林仁勇
目的利用激光共聚焦显微镜对体外培养的细粒棘球蚴进行荧光染色三维重建,探讨荧光三维重建技术在细粒棘球蚴结构解析中的应用价值。方法建立细粒棘球蚴体外培养体系,制作细粒棘球蚴冰冻切片,设置活体观察组、冰冻切片组及三维重建组3组,分别利用细胞核荧光染料DAPI(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)和细胞膜荧光探针DiI(1,1'- Dioctadecyl-3,3,3',3'- Tetramethylindocarbocyanine Perchlorate,DiI)对虫体进行染色,置于激光共聚焦显微镜下进行图像采集或三维重建,比较3种荧光成像方式的异同。结果DAPI及DiI荧光可分别标记出细粒棘球蚴的细胞核与细胞膜结构。活体观察组仅良好显示虫体外膜结构,与冰冻切片组及三维重建组相比,虫体内部结构荧光结合效率低,无法实现虫体内部结构解析;冰冻切片组虫体内外部结构荧光标记效率高,但虫体形态均由外翻型棘球蚴转变为内陷型,虫体表面出现明显皱缩,提示虫体结构遭到破坏;三维重建组虫体形态良好,虫体内外部结构荧光结果效率高,三维重建后可同时显示虫体内外部的荧光分布。结论荧光三维重建技术应用于细粒棘球蚴的结构解析,可获取荧光信号在细粒棘球蚴空间上的分布信息,具有较好的应用价值。