Identification of the Collagen-binding Site of the von Willebrand Factor A3-domain*
Identification of the Collagen-binding Site of the von Willebrand Factor A3-domain*
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冯维勒布兰德因子 A3 结构域的胶原蛋白结合位点的鉴定*
DOI：
10.1074/jbc.m006548200
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发表时间：
2001
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
E. Huizinga
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
R. Romijn;B. Bouma;Winnifred Wuyster;P. Gros;J. Kroon;J. Sixma;E. Huizinga
血管性血友病因子 (vWF) 是一种多聚体糖蛋白，可介导血管损伤部位的血小板粘附和血栓形成。 vWF 充当胶原蛋白和血小板受体糖蛋白 Ib 之间的分子桥梁。 vWF 的主要胶原蛋白结合位点包含在 A3 结构域内，但其精确位置尚不清楚。为了定位胶原蛋白结合位点，我们确定了 A3 与抑制胶原蛋白结合的抗体 RU5 的 Fab 片段复合物的晶体结构。该结构显示 RU5 识别由残基 962-966、981-997 和 1022-1026 组成的非线性表位。丙氨酸突变体由位于表位内或附近的残基 Arg963、Glu987、His990、Arg1016 和 His1023 构建。突变体表达为完全加工的多聚体 vWF。 His1023 的突变消除了胶原蛋白的结合，而 Arg963 和 Arg1016 的突变则使胶原蛋白的结合减少了 25-35%。这些残基分别是环 α3β4 和 α1β2 以及 α-螺旋 3 的一部分，位于结构域的底面附近。 His1023 和侧翼残基在可用的 A3 晶体结构中显示出多种构象，表明 A3 与胶原蛋白的结合涉及诱导拟合机制。 A3 的胶原蛋白结合位点远离该结构域的顶面，其中在同源整联蛋白 I 结构域中发现了胶原蛋白结合位点。
Von Willebrand factor (vWF) is a multimeric glycoprotein that mediates platelet adhesion and thrombus formation at sites of vascular injury. vWF functions as a molecular bridge between collagen and platelet receptor glycoprotein Ib. The major collagen-binding site of vWF is contained within the A3 domain, but its precise location is unknown. To localize the collagen-binding site, we determined the crystal structure of A3 in complex with an Fab fragment of antibody RU5 that inhibits collagen binding. The structure shows that RU5 recognizes a nonlinear epitope consisting of residues 962–966, 981–997, and 1022–1026. Alanine mutants were constructed of residues Arg963, Glu987, His990, Arg1016, and His1023, located in or close to the epitope. Mutants were expressed as fully processed multimeric vWF. Mutation of His1023 abolished collagen binding, whereas mutation of Arg963 and Arg1016 reduced collagen binding by 25–35%. These residues are part of loops α3β4 and α1β2 and α-helix 3, respectively, and lie near the bottom face of the domain. His1023 and flanking residues display multiple conformations in available A3-crystal structures, suggesting that binding of A3 to collagen involves an induced-fit mechanism. The collagen-binding site of A3 is located distant from the top face of the domain where collagen-binding sites are found in homologous integrin I domains.
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纯化的冯维勒布兰德因子与天然单体胶原蛋白的结合和共价交联。
DOI：
10.1172/jci112608
发表时间：
1986
期刊：
The Journal of clinical investigation
影响因子：
--
作者：
Bockenstedt,P;McDonagh,J;Handin,RI
通讯作者：
Handin,RI
DOI：
10.1016/s0021-9258(18)47151-7
发表时间：
1994-10
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
T. Kamata;Yoshikazu Takada
通讯作者：
T. Kamata;Yoshikazu Takada
分离与血小板糖蛋白 Ib、肝素和胶原蛋白相互作用的冯维勒布兰德因子结构域，并表征其三个不同的功能位点。
DOI：
--
发表时间：
1989
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Mohri,H;Yoshioka,A;Zimmerman,TS;Ruggeri,ZM
通讯作者：
Ruggeri,ZM
影响因子：
56.9
作者：
STANFIELD, RL;FIESER, TM;WILSON, IA
通讯作者：
WILSON, IA