An LC-MS Approach to Quantitative Measurement of Ammonia Isotopologues.
An LC-MS Approach to Quantitative Measurement of Ammonia Isotopologues.
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DOI：
10.1038/s41598-017-09993-6
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发表时间：
2017-09-04
影响因子：
4.6
通讯作者：
Haigis MC
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Spinelli JB;Kelley LP;Haigis MC
氨是跨越整个系统发育的新陈代谢的基本方面。代谢组学，包括代谢追踪研究，是阐明氨在这些系统中的作用的重要组成部分。然而，目前测量氨的方法是分光光度法，无法区分氨的同位素异构体，这极大地限制了代谢示踪研究。在这里，我们描述了一种基于 LC-MS 的新型方法，可定量评估极性代谢物提取物中氨的 14N-和 15N-同位素异构体。该测定 (1) 定量测量用于代谢组学研究的极性代谢物分离物中的氨浓度，(2) 准确测定细胞裂解液中 15N-氨的同位素丰度百分比，用于 15N-同位素示踪研究。我们应用这种测定法定量测量谷氨酰胺酶差异表达的肺癌细胞系中谷氨酰胺衍生的氨。
Ammonia is a fundamental aspect of metabolism spanning all of phylogeny. Metabolomics, including metabolic tracing studies, are an integral part of elucidating the role of ammonia in these systems. However, current methods for measurement of ammonia are spectrophotometric, and cannot distinguish isotopologues of ammonia, significantly limiting metabolic tracing studies. Here, we describe a novel LC-MS-based method that quantitatively assesses both 14N-and 15N-isotopologues of ammonia in polar metabolite extracts. This assay (1) quantitatively measures the concentration of ammonia in polar metabolite isolates used for metabolomic studies, and (2) accurately determines the percent isotope abundance of 15N-ammonia in a cell lysate for 15N-isotope tracing studies. We apply this assay to quantitatively measure glutamine-derived ammonia in lung cancer cell lines with differential expression of glutaminase.
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