PI3K-C2α knockdown decreases autophagy and maturation of endocytic vesicles.
PI3K-C2α knockdown decreases autophagy and maturation of endocytic vesicles.
复制标题
DOI：
10.1371/journal.pone.0184909
复制
发表时间：
2017
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
MacKeigan JP
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Merrill NM;Schipper JL;Karnes JB;Kauffman AL;Martin KR;MacKeigan JP
磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)家族成员参与多种细胞命运，包括细胞的生长、增殖和存活。虽然关于第I类和第III类PI3K的许多分子细节已知，但对第II类PI3K知之甚少。为了探索所有8种PI3K亚型在自噬中的作用，我们分别敲除了每个基因并测量了自噬。我们发现，在siRNA介导的PIK3C2A(编码2类PI3K，PI3K-C2α)被敲除后，自噬显著减少。这种缺陷的自噬可以被外源PI3K-C2α拯救，但不能被激酶死亡的PI3K-C2α拯救。利用共聚焦显微镜，我们探索了内吞和自噬的标志物，发现PI3K-C2α与内吞的标志物共定位。尽管如转铁蛋白标记所证明的那样，内吞是完整的，但PIK3C2A基因敲除会导致小泡在循环内小体积累。我们分离了不同的膜来源，并观察到PI3K-C2α与内吞和自噬的标志相互作用，特别是ATG9。PIK3C2A或ATG9A/B的敲除，而不是PI3KC3的敲除，会导致转铁蛋白阳性的笼状蛋白包被的小泡和Rab11阳性的小泡在循环内体积累。综上所述，这些结果支持PI3K-C2α在内体成熟过程中的作用，并提示PI3K-C2α可能是连接内吞和自噬途径的关键节点。
Phosphoinositide 3-kinase (PI3K) family members are involved in diverse cellular fates including cell growth, proliferation, and survival. While many molecular details are known about the Class I and III PI3Ks, less is known about the Class II PI3Ks. To explore the function of all eight PI3K isoforms in autophagy, we knock down each gene individually and measure autophagy. We find a significant decrease in autophagy following siRNA-mediated PIK3C2A (encoding the Class 2 PI3K, PI3K-C2α) knockdown. This defective autophagy is rescued by exogenous PI3K-C2α, but not kinase-dead PI3K-C2α. Using confocal microscopy, we probe for markers of endocytosis and autophagy, revealing that PI3K-C2α colocalizes with markers of endocytosis. Though endocytic uptake is intact, as demonstrated by transferrin labeling, PIK3C2A knockdown results in vesicle accumulation at the recycling endosome. We isolate distinct membrane sources and observe that PI3K-C2α interacts with markers of endocytosis and autophagy, notably ATG9. Knockdown of either PIK3C2A or ATG9A/B, but not PI3KC3, results in an accumulation of transferrin-positive clathrin coated vesicles and RAB11-positive vesicles at the recycling endosome. Taken together, these results support a role for PI3K-C2α in the proper maturation of endosomes, and suggest that PI3K-C2α may be a critical node connecting the endocytic and autophagic pathways.
登录
查看更多内容
影响因子：
6
作者：
Gallagher LE;Williamson LE;Chan EY
通讯作者：
Chan EY
影响因子：
64.8
作者：
Ichimura, Y;Kirisako, T;Ohsumi, Y
通讯作者：
Ohsumi, Y
影响因子：
4.8
作者：
Domin, J;Gaidarov, I;Waterfield, MD
通讯作者：
Waterfield, MD
影响因子：
11.8
作者：
Franco, Irene;Gulluni, Federico;Campa, Carlo C.;Costa, Carlotta;Margaria, Jean Piero;Ciraolo, Elisa;Martini, Miriam;Monteyne, Daniel;De Luca, Elisa;Germena, Giulia;Posor, York;Maffucci, Tania;Marengo, Stefano;Haucke, Volker;Falasca, Marco;Perez-Morga, David;Boletta, Alessandra;Merlo, Giorgio R.;Hirsch, Emilio
通讯作者：
Hirsch, Emilio
影响因子：
5.2
作者：
Elis, Winfried;Triantafellow, Ellen;MacKeigan, Jeffrey P.
通讯作者：
MacKeigan, Jeffrey P.