A photoaffinity probe that targets folate-binding proteins.
A photoaffinity probe that targets folate-binding proteins.
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DOI：
10.1016/j.bmcl.2021.127903
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发表时间：
2021-05-15
影响因子：
2.7
通讯作者：
Wolan DW
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Takamura A;Thuy-Boun PS;Kitamura S;Han Z;Wolan DW
叶酸和相关的衍生物是生存所必需的小分子。值得注意的是，叶酸在共生生物及其各自的宿主之间的串扰中的生物学作用和必要性，包括极其复杂的人类远端肠道微生物组。在这里，我们设计了一种基于叶酸的探针，由光交联剂组成，用于检测和定量蛋白质组样品中的叶酸结合蛋白。我们证明了我们的探针对已建立的人叶酸结合蛋白二氢叶酸还原酶的选择性，并显示作为阴性对照的人caspase-3或牛血清白蛋白没有出现混杂标记。以亲和力为基础的从大肠杆菌裂解液中富集叶酸结合蛋白，结合质谱学蛋白质组学，验证了我们的探针分离低丰度叶酸依赖蛋白的能力。我们设想，我们的探针将作为一种工具，阐明共生微生物叶酸结合蛋白在健康和微生物组相关疾病中的作用。
Folate and related derivatives are essential small molecules required for survival. Of significant interest is the biological role and necessity of folate in the crosstalk between commensal organisms and their respective hosts, including the tremendously complex human distal gut microbiome. Here, we designed a folate-based probe consisting of a photo-crosslinker to detect and quantitate folate-binding proteins from proteomic samples. We demonstrate the selectivity of our probe for the well-established human folate-binding protein dihydrofolate reductase and show no promiscuous labeling occurs with human caspase-3 or bovine serum albumin, which served as negative controls. Affinity-based enrichment of folate-binding proteins from an E. coli lysate in combination with mass spectrometry proteomics verified the ability of our probe to isolate low-abundance folate-dependent proteins. We envision that our probe will serve as a tool to elucidate the roles of commensal microbial folate-binding proteins in health and microbiome-related diseases.
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