Construction of recombinant HEK293 cell lines for the expression of the neurotensin receptor NTSR1.
Construction of recombinant HEK293 cell lines for the expression of the neurotensin receptor NTSR1.
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构建表达神经降压素受体 NTSR1 的重组 HEK293 细胞系。
DOI：
10.1007/978-1-4939-2336-6_4
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发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Grisshammer,Reinhard
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Xiao,Su;Shiloach,Joseph;Grisshammer,Reinhard
G蛋白偶联受体（GPCR）与多种疾病相关，是全球销售的大多数药物的靶点。尽管具有临床重要性，但截至2014年4月，仅确定了25种独特的GPCR结构。结构研究的第一步是确定重组宿主细胞中正确折叠的功能性受体的表达量，以允许随后的纯化和结晶试验。在这里，我们描述了T-REx™诱导型表达系统来构建和选择用于高水平表达功能性神经降压素受体I型（NTSR 1）的稳定HEK 293细胞系。我们还提出了用于适应悬浮培养的细胞的协议，以及NTSR 1表达的诱导参数的优化，这导致了1毫克的纯化NTSR 1每升悬浮培养物中的生物反应器。
G protein-coupled receptors (GPCRs) are associated with a wide array of diseases and are targets of most of the medicines sold worldwide. Despite their clinical importance, only 25 unique GPCR structures have been determined as of April 2014. The first step for structural studies is to establish the expression of correctly folded, functional receptors in recombinant host cells at quantities to allow subsequent purification and crystallization trials. Here we describe the T-REx™-inducible expression system to construct and select a stable HEK293 cell line for high-level expression of functional neurotensin receptor type I (NTSR1). We also present the protocols used for the adaptation of the cells into suspension culture, as well as the optimization of the induction parameters for NTSR1 expression, which led to 1 mg of purified NTSR1 per liter suspension culture in bioreactors.
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