Direct interaction between XRCC1 and UNG2 facilitates rapid repair of uracil in DNA by XRCC1 complexes.
Direct interaction between XRCC1 and UNG2 facilitates rapid repair of uracil in DNA by XRCC1 complexes.
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DOI：
10.1016/j.dnarep.2010.04.002
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发表时间：
2010-07-01
期刊：
影响因子：
3.8
通讯作者：
Otterlei M
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Akbari M;Solvang-Garten K;Hanssen-Bauer A;Lieske NV;Pettersen HS;Pettersen GK;Wilson DM 3rd;Krokan HE;Otterlei M
尿嘧啶-DNA 糖基化酶 UNG2 与 PCNA 相互作用，启动 DNA 中尿嘧啶的复制后碱基切除修复 (BER)。 DNA 修复蛋白 XRCC1 也与 PCNA 共定位并发生物理相互作用。然而，对于 UNG2 和 XRCC1 是否直接相互作用并参与复制灶中尿嘧啶修复的同一复合物知之甚少。在这里，我们检查了这些蛋白质在活细胞和固定细胞中的定位模式，并表明 UNG2 和 XRCC1 可能位于复制灶的共同复合物中。通过下拉实验，我们证明 UNG2 直接与 XRCC1 的核定位信号区 (NLS) 相互作用。对从 S 期富集细胞制备的全细胞提取物进行免疫沉淀物的蛋白质印迹和功能分析表明，除了具有不同修复特征的独立 XRCC1 和 UNG2 相关复合物之外，还存在含有 UNG2 的 XRCC1 复合物。 XRCC1 复合物对尿嘧啶进行了完全修复，其功效比 UNG2 复合物更高。基于这些结果，我们提出了 XRCC1 在尿嘧啶复制相关 BER 中的功能作用模型。
Uracil-DNA glycosylase, UNG2, interacts with PCNA and initiates post-replicative base excision repair (BER) of uracil in DNA. The DNA repair protein XRCC1 also co-localizes and physically interacts with PCNA. However, little is known about whether UNG2 and XRCC1 directly interact and participate in a same complex for repair of uracil in replication foci. Here, we examine localization pattern of these proteins in live and fixed cells and show that UNG2 and XRCC1 are likely in a common complex in replication foci. Using pull-down experiments we demonstrate that UNG2 directly interacts with the nuclear localization signal-region (NLS) of XRCC1. Western blot and functional analysis of immunoprecipitates from whole cell extracts prepared from S-phase enriched cells demonstrate the presence of XRCC1 complexes that contain UNG2 in addition to separate XRCC1 and UNG2 associated complexes with distinct repair features. XRCC1 complexes performed complete repair of uracil with higher efficacy than UNG2 complexes. Based on these results, we propose a model for a functional role of XRCC1 in replication associated BER of uracil.
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