钩端螺旋体c-di-AMP结合蛋白调控钾离子转运
钩端螺旋体c-di-AMP结合蛋白调控钾离子转运
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DOI：
10.3760/cma.j.cn112309-20230202-00018
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发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
胡玮琳
中科院分区：
文献类型：
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作者：
戴欣珏;姚丽琴;陈婧;胡玮琳
目的寻找和鉴定钩端螺旋体中编码第二信使c-di-AMP结合蛋白KtrA,并探究c-di-AMP-KtrA/B系统的功能及调控机制。方法采用PCR扩增ktrA基因并克隆入pET42a质粒获得pET42aktrA原核表达载体,将其转入表达宿主菌中获得表达rKtrA的工程菌E. coli BL21DE3pET42a-ktrA。通过亲和层析法提纯上述工程菌表达的重组蛋白rKtrA后,运用BIAcore技术检测rKtrA与c-di-AMP的结合能力。采用细菌双杂交法检测钩端螺旋体Ktr系统中KtrA与KtrB的结合能力以及外源c-di-AMP对其结合的调控机制。通过在钾离子转运功能缺失大肠埃希菌LB2003株中回补相关基因,分析c-di-AMP-KtrA/B通路功能。结果成功构建钩端螺旋体ktrA基因原核表达工程菌,纯化的rKtrA可与c-di-AMP特异性结合;KtrA可与KtrB发生相互作用,该结合作用可被c-di-AMP解离;KtrA/B系统参与调控钾离子的摄取,该系统功能受c-di-AMP负调控。结论钩端螺旋体KtrA为c-di-AMP结合蛋白,c-di-AMP-KtrA/B系统参与调控钾离子的转运。