Mafb基因敲除小鼠的构建及其尿道下裂表型初步分析
Mafb基因敲除小鼠的构建及其尿道下裂表型初步分析
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DOI：
10.16781/j.cn31-2187/r.20210861
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发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
魏光辉
中科院分区：
文献类型：
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作者：
刘振忞;孔晓燕;沈炼桔;龙春兰;刘星;魏光辉
目的利用成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)及其相关蛋白9(Cas9)构建v-maf肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物B(Mafb)基因敲除小鼠,初步研究该基因缺失对尿道发育的影响。方法根据CRISPR/Cas9技术原理构建Mafb基因敲除F0代C57BL/6J小鼠;经PCR及基因测序鉴定阳性的F0代小鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配繁殖,获得F1代Mafb基因敲除杂合子(Mafb~(+/-))小鼠;Mafb~(+/-)小鼠间进行交配繁殖,获得Mafb基因敲除纯合子(Mafb~(-/-))胎鼠。收集雄性Mafb~(-/-)胎鼠阴茎组织,通过免疫荧光技术检测阴茎组织中Mafb蛋白表达情况及尿道缝处上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达情况,扫描电子显微镜及石蜡切片H-E染色观察阴茎组织形态。结果成功构建、繁育Mafb~(+/-)小鼠并得到雄性Mafb~(-/-)胎鼠。免疫荧光检测结果显示雄性Mafb~(-/-)胎鼠阴茎组织中几乎不存在Mafb蛋白表达,且相较于野生型小鼠其尿道缝处E-cadherin蛋白表达明显降低、 α-SMA蛋白表达明显增高;扫描电子显微镜及H-E染色显示雄性Mafb~(-/-)胎鼠为尿道下裂表型。结论成功构建Mafb基因敲除小鼠模型,该基因敲除可导致小鼠出现尿道下裂表型及尿道缝处细胞中E-cadherin和α-SMA的表达差异,为进一步研究该基因在尿道下裂发生机制中的作用奠定了基础。