LPS对牦牛瘤胃上皮细胞补体C3激活和ATP生成代谢的影响
LPS对牦牛瘤胃上皮细胞补体C3激活和ATP生成代谢的影响
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DOI：
10.11843/j.issn.0366-6964.2023.11.021
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发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
胡瑞
中科院分区：
文献类型：
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作者：
张祺琪;王俊梅;岳子奇;郭逸芯;施丽媛;张晓红;邹华围;彭全辉;薛白;王立志;王之盛;胡瑞
旨在通过脂多糖(LPS)诱导牦牛瘤胃上皮细胞建立炎症模型,考察瘤胃上皮细胞作为非免疫细胞是否存在细胞内补体C3激活,及其对细胞三磷酸腺苷(ATP)生成的影响,为瘤胃健康营养调控技术提供试验依据。用不同浓度的LPS处理牦牛瘤胃上皮细胞系,采用CCK-8法测定细胞活力;ELISA试剂盒测定细胞内补体C3激活产物C3a、C3b浓度以及培养基中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度;化学法检测细胞内ATP浓度,线粒体红色荧光探针和流式细胞仪检测线粒体数量及膜电位;qPCR检测细胞IL-1β、IL-6、TNF-α,补体C3及其激活关键酶组织蛋白酶B(CTSB)和组织蛋白酶L(CTSL),以及ATP合成酶亚基(ATP5A和ATP5C1)等基因相对表达量。结果发现:1)不同浓度LPS处理后,牦牛瘤胃上皮细胞活力极显著下调(P <0.01),TNF-α、IL-1β和IL-6等促炎因子的基因表达量和浓度极显著上调(P <0.01),在LPS浓度为10 μg·mL~(-1)时,牦牛瘤胃上皮细胞炎症模型构建成功;2)炎症下,牦牛瘤胃上皮细胞内补体C3及其激活关键酶CTSB的基因表达量极显著升高(P <0.01),激活产物补体片段C3a和C3b浓度极显著升高(P <0.01);3)炎症下,牦牛瘤胃上皮细胞ATP含量极显著下降(P <0.01),线粒体膜电位显著降低(P <0.05),ATP合成酶亚基ATP5A和ATP5C1的基因表达量随着LPS处理浓度升高显著下调(P <0.01)。综上,利用LPS诱导建立了牦牛瘤胃上皮细胞炎症模型。在LPS刺激下,牦牛瘤胃上皮细胞可发生细胞内补体C3激活过程,并抑制线粒体ATP合成酶亚基ATP5A、ATP5C1和有氧呼吸关键酶ME1的基因表达,线粒体膜电位降低,抑制ATP生成。因此, LPS诱导炎症可抑制瘤胃上皮细胞ATP生成,从而导致瘤胃健康问题。