一种基于丝裂霉素诱导的人脂肪干细胞衰老模型
一种基于丝裂霉素诱导的人脂肪干细胞衰老模型
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DOI：
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发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
孙雪荣
中科院分区：
文献类型：
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作者：
张明萌;饶敏腊;刘亭亭;陈艺琳;赵威;廖小欣;李晓毅;彭健愉;刘新光;孙雪荣
目的 建立一种简单有效的人脂肪干细胞( adipose- derived stem cells， ADSCs) 衰老模型， 为研究 ADSCs 衰老机制及抗衰老药物筛选奠定基础 方法 分别用0. 5 g /ml， 1 g /ml 和3 g /ml 的丝裂霉素( MMC) 处理 ADSCs， 以正常培养组作为阴性对照( NC) ， 利用 - gal 活性染色检测不同浓度 MMC 对 ADSCs 衰老情况的影响; 然后将正常培养与0. 5 g /ml MMC 处理的 ADSCs 分别进行高通量芯片检测， 分析找出两组 ADSCs 差异表达的衰老相关基因; 利用 qRT- PCR 和 ELISA 验证部分 SASP( IL- 6 IL- 8 IL- 1 IL- 1 和 TNF- ) 及其他衰老相关基因( p16 p21 p53) 的表达， 并用 Western blot 检测 p21 和 H2AX 的表达 结果 与正常培养的 ADSCs 相比， 0. 5 g /ml， 1 g /ml 和3 g /ml MMC 均可诱导 ADSCs 增殖停滞， 细胞体积增大，-gal 染色阳性率升高( P ＜ 0. 01) RNA 芯片检测发现， MMC 处理的 ADSCs 富集了多种衰老相关分泌表型( SASP) 基因， 包括IL- 6 IL- 8 IL- 1 IL- 1 和 TNF- 在 MMC( 0. 5 g /ml) 处理 ADSCs 后第 7 天， Western blot 结果显示， 细胞表达 p21 和H2AX 蛋白明显上调， qRT- PCR 和 ELISA 检测表明， SASP 基因 IL- 6 IL- 8 IL- 1 和 IL- 1 表达和( 或) 分泌出现一定程度上调，其中 IL- 1 和 IL- 1 表达差异有统计学意义( P ＜ 0. 05) ， TNF- p16 p21 p53 无明显变化( P ＞ 0. 05) 结论 MMC 处理的ADSCs 表现出细胞衰老的一般特点， 并可分泌多种衰老相关 SASP 本文成功建立了一种基于 MMC 诱导的 具有典型衰老特征的 ADSCs 衰老细胞模型。