Pulsed ESR dipolar spectroscopy for distance measurements in immobilized spin labeled proteins in liquid solution.
Pulsed ESR dipolar spectroscopy for distance measurements in immobilized spin labeled proteins in liquid solution.
复制标题
DOI：
10.1021/ja303791p
复制
发表时间：
2012-06-20
影响因子：
15
通讯作者：
Hubbell, Wayne L.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Yang, Zhongyu;Liu, Yangping;Borbat, Peter;Zweier, Jay L.;Freed, Jack H.;Hubbell, Wayne L.
脉冲电子自旋共振（ESR）偶极光谱（PDS）结合定点自旋标记在提供生物系统中的纳米范围距离和分布方面是独特的。迄今为止，大多数脉冲ESR技术需要在低温下冷冻溶液，以降低快速的电子自旋弛豫速率，并防止由于快速分子翻滚而导致的电子-电子偶极相互作用的平均化。为了能够在液体溶液中进行测量，我们正在探索一种基于三芳基甲基（TAM）的自旋标记物，其具有相对较长的弛豫时间，其中蛋白质通过附着到固体支持物上而被固定。在这项初步研究中，TAM自由基连接通过二硫键取代的半胱氨酸残基在位置65和80或65和76在T4溶菌酶固定在琼脂糖凝胶。在溶液中使用双量子相干（DQC）确定的自旋间距离接近于模型预期的距离，并且在每种情况下的窄距离分布表明基于TAM的自旋标签相对局部化。
Pulsed electron spin resonance (ESR) dipolar spectroscopy (PDS) in combination with site-directed spin labeling is unique in providing nanometer- range distances and distributions in biological systems. To date, most of the pulsed ESR techniques require frozen solutions at cryogenic temperatures to reduce the rapid electron spin relaxation rate and to prevent averaging of electron-electron dipolar interaction due to the rapid molecular tumbling. To enable measurements in liquid solution, we are exploring a triarylmethyl (TAM)-based spin label with a relatively long relaxation time where the protein is immobilized by attachment to a solid support. In this preliminary study, TAM radicals were attached via disulfide linkages to substituted cysteine residues at positions 65 and 80 or 65 and 76 in T4 lysozyme immobilized on Sepharose. Interspin distances determined using double quantum coherence (DQC) in solution are close to those expected from models, and the narrow distance distribution in each case indicates that the TAM-based spin label is relatively localized.
登录
查看更多内容
DOI：
10.1073/pnas.0908050107
发表时间：
2010-02-02
影响因子：
11.1
作者：
Roessler, Maxie M.;King, Martin S.;Hirst, Judy
通讯作者：
Hirst, Judy
影响因子：
4.8
作者：
Jao, Christine C.;Hegde, Balachandra G.;Langen, Ralf
通讯作者：
Langen, Ralf
影响因子：
15
作者：
Borbat, PP;Mchaourab, HS;Freed, JH
通讯作者：
Freed, JH
影响因子：
2.2
作者：
Chiang, YW;Borbat, PP;Freed, JH
通讯作者：
Freed, JH
影响因子：
4.4
作者：
Saxena, S;Freed, JH
通讯作者：
Freed, JH