Towards in cellulo virus crystallography.
Towards in cellulo virus crystallography.
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DOI：
10.1038/s41598-018-21693-3
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发表时间：
2018-02-28
影响因子：
4.6
通讯作者：
Bamford DH
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Duyvesteyn HME;Ginn HM;Pietilä MK;Wagner A;Hattne J;Grimes JM;Hirvonen E;Evans G;Parsy ML;Sauter NK;Brewster AS;Huiskonen JT;Stuart DI;Sutton G;Bamford DH
病毒对人类健康和经济构成重大威胁，迫切需要新型抗病毒药物和疫苗。高分辨率病毒结构有助于我们了解病毒圈，并激发新的治疗方法。在这里，我们提出了一种通过从完整的感染细胞收集衍射数据来获取此类结构信息的方法，避免潜在的破坏性处理。我们确定了细胞类型和病毒的合适组合，以在细胞中积累颗粒，建立大多数细胞含有病毒凝聚物的合适时间点，并使用电子显微镜证明这些是空衣壳的有序晶体阵列。然后，我们使用无 X 射线电子激光器在室温下为活体大肠杆菌内噬菌体 phiX174 的亚微米细胞内凝聚物提供极其明亮的照明。我们已经能够收集低分辨率衍射数据。尽管这些初始数据的分辨率和完整性有限，但由于远非最佳实验设置，我们使用了新颖的方法来确定假定的空间群、晶胞尺寸、颗粒堆积和颗粒可能的成熟状态。
Viruses are a significant threat to both human health and the economy, and there is an urgent need for novel anti-viral drugs and vaccines. High-resolution viral structures inform our understanding of the virosphere, and inspire novel therapies. Here we present a method of obtaining such structural information that avoids potentially disruptive handling, by collecting diffraction data from intact infected cells. We identify a suitable combination of cell type and virus to accumulate particles in the cells, establish a suitable time point where most cells contain virus condensates and use electron microscopy to demonstrate that these are ordered crystalline arrays of empty capsids. We then use an X-ray free electron laser to provide extremely bright illumination of sub-micron intracellular condensates of bacteriophage phiX174 inside living Escherichia coli at room temperature. We have been able to collect low resolution diffraction data. Despite the limited resolution and completeness of these initial data, due to a far from optimal experimental setup, we have used novel methodology to determine a putative space group, unit cell dimensions, particle packing and likely maturation state of the particles.
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影响因子：
16.6
作者：
Kern, Jan;Tran, Rosalie;Alonso-Mori, Roberto;Koroidov, Sergey;Echols, Nathaniel;Hattne, Johan;Ibrahim, Mohamed;Gul, Sheraz;Laksmono, Hartawan;Sierra, Raymond G.;Gildea, Richard J.;Han, Guangye;Hellmich, Julia;Lassalle-Kaiser, Benedikt;Chatterjee, Ruchira;Brewster, Aaron S.;Stan, Claudiu A.;Gloeckner, Carina;Lampe, Alyssa;DiFiore, Doertee;Milathianaki, Despina;Fry, Alan R.;Seibert, M. Marvin;Koglin, Jason E.;Gallo, Erik;Uhlig, Jens;Sokaras, Dimosthenis;Weng, Tsu-Chien;Zwart, Petrus H.;Skinner, David E.;Bogan, Michael J.;Messerschmidt, Marc;Glatzel, Pieter;Williams, Garth J.;Boutet, Sebastien;Adams, Paul D.;Zouni, Athina;Messinger, Johannes;Sauter, Nicholas K.;Bergmann, Uwe;Yano, Junko;Yachandra, Vittal K.
通讯作者：
Yachandra, Vittal K.
DOI：
10.1107/s2059798316010706
发表时间：
2016-08
期刊：
Acta crystallographica. Section D, Structural biology
影响因子：
--
作者：
Ginn HM;Roedig P;Kuo A;Evans G;Sauter NK;Ernst OP;Meents A;Mueller-Werkmeister H;Miller RJ;Stuart DI
通讯作者：
Stuart DI
影响因子：
3.6
作者：
Bernhardt, TG;Roof, WD;Young, R
通讯作者：
Young, R
影响因子：
3
作者：
Kremer, JR;Mastronarde, DN;McIntosh, JR
通讯作者：
McIntosh, JR
影响因子：
35
作者：
Emma, P.;Akre, R.;Galayda, J.
通讯作者：
Galayda, J.