牛支原体脂质相关膜蛋白 P 48、D naK 和 L-LD H 免疫 反应原性的鉴定及分析
牛支原体脂质相关膜蛋白 P 48、D naK 和 L-LD H 免疫 反应原性的鉴定及分析
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DOI：
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发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
辛九庆
中科院分区：
文献类型：
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作者：
刘桐;潘巧;谨瑾;曾金红;李媛;徐青元;辛九庆
为筛选并鉴定免疫反应原性良好的牛支原体（M. bovis）蛋白，本研究提取 M. bovis TJ 株脂质相关膜蛋.白（LAMPs），通过 AKTA 分子筛筛选，将 M. bovis LAMPs 分为 5 组，经 dot blot 试验鉴定各组 LAMPs 的免疫反应原.性，并经蛋白质谱分析其蛋白组分。结果显示，5 组 LAMPs 中有 1 组膜蛋白反应原性较好，且结合蛋白匹配度得.分的排名顺序和基因注释，选定 P48、DnaK 和 L-LDH 为候选蛋白。将该 3 种蛋白经原核表达、纯化及 western blot.检测其反应原性；并进一步分别以该 3 种重组蛋白为包被抗原，采用 ELISA 方法（rP48-ELISA、rDnaK-ELISA、.rL-LDH-ELISA） 检测并利用 Graphpad prism 8 软件分析并计算该 3 种方法的特异性、敏感性及其与牛鼻支原体、.丝状支原体丝状亚种 SC 型、牛病毒性腹泻病毒、口蹄疫病毒、牛传染性鼻气管炎病毒阳性血清的交叉反应性。.Western blot 结果显示，3 种重组蛋白均能与 M. bovis 阳性血清反应，反应原性较好；ELISA 结果显示，rP48-.ELISA、rDnaK-ELISA、rL-LDH-ELISA 方法的特异性分别为 96%、94%和 98%，敏感性分别为 98%、92%和.94%。交叉反应性试验结果显示，M. bovis rDnaK 和 rL-LDH 均能与牛鼻支原体阳性血清发生交叉反应，而 M. bovis.rP48 与牛其他临床常见呼吸道病原阳性血清均无交叉反应，表明其具有作为检测 M. bovis ELISA 方法候选包被抗.原的潜力。本研究为进一步筛选 M. bovis 亚单位疫苗抗原及快速诊断方法的候选抗原奠定实验基础。