Genetic incorporation of a small, environmentally sensitive, fluorescent probe into proteins in Saccharomyces cerevisiae.
Genetic incorporation of a small, environmentally sensitive, fluorescent probe into proteins in Saccharomyces cerevisiae.
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DOI：
10.1021/ja904896s
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发表时间：
2009-09-16
影响因子：
15
通讯作者：
Schultz, Peter G.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Lee, Hyun Soo;Guo, Jiantao;Lemke, Edward A.;Dimla, Romerson D.;Schultz, Peter G.
在此，我们报道荧光氨基酸 3-(6-乙酰基萘-2-基氨基)-2-氨基丙酸 (Anap) 可以通过正交 tRNA/氨酰基-tRNA 合成酶对以优异的选择性和效率通过基因整合到酵母中的蛋白质中。这种小的、环境敏感的荧光团被位点特异性地整合到大肠杆菌谷氨酰胺结合蛋白中，并用于直接探测由配体结合引起的局部结构变化。 Anap 尺寸小，并且能够通过简单诱变将其引入蛋白质组中的特定位点，这使其成为蛋白质结构、分子相互作用、蛋白质折叠和定位的有用局部探针。
Here, we report that the fluorescent amino acid, 3-(6-acetylnaphthalen-2-ylamino)-2-aminopropanoic acid (Anap), can be genetically incorporated into proteins in yeast with excellent selectivity and efficiency by means of an orthogonal tRNA/aminoacyl-tRNA synthetase pair. This small, environmentally sensitive fluorophore was site-specifically incorporated intoEscherichia coliglutamine binding protein and used to directly probe local structural changes caused by ligand binding. The small size of Anap and the ability to introduce it by simple mutagenesis at defined sites in the proteome make it a useful local probe of protein structure, molecular interactions, protein folding, and localization.
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