CtIP fusion to Cas9 enhances transgene integration by homology-dependent repair.
CtIP fusion to Cas9 enhances transgene integration by homology-dependent repair.
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DOI：
10.1038/s41467-018-03475-7
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发表时间：
2018-03-19
影响因子：
16.6
通讯作者：
Concordet JP
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Charpentier M;Khedher AHY;Menoret S;Brion A;Lamribet K;Dardillac E;Boix C;Perrouault L;Tesson L;Geny S;De Cian A;Itier JM;Anegon I;Lopez B;Giovannangeli C;Concordet JP
在使用 CRISPR-Cas9 进行基因组编辑时，转基因整合通常仍然具有挑战性。在这里，我们提出了一种通过同源依赖性修复（HDR）提高转基因整合效率的方法。 CtIP 是同源重组早期步骤中的关键蛋白，它与 Cas9 融合，并通过 HDR 在人类 AAVS1 安全港位点刺激转基因整合。 CtIP 的最小 N 端片段（称为 HDR 增强子 HE）足以刺激 HDR，这取决于 CDK 磷酸化位点和同源重组中 CtIP 活性所必需的多聚化结构域。然而，Cas9-HE 的 HDR 刺激取决于所使用的向导 RNA，这一限制可以通过测试感兴趣位点的多个向导来克服。 Cas9-HE 融合使用简单，并且可以在多个实验系统（包括人类细胞系、iPS 细胞和大鼠受精卵）中获得比 Cas9 两倍或更有效的转基因整合。使用 CRISPR-Cas9 将外源 DNA 整合到基因组中常常给研究人员带来挑战。在这里，作者将 CtIP 与 Cas9 融合以刺激目标位点的重组。
In genome editing with CRISPR–Cas9, transgene integration often remains challenging. Here, we present an approach for increasing the efficiency of transgene integration by homology-dependent repair (HDR). CtIP, a key protein in early steps of homologous recombination, is fused to Cas9 and stimulates transgene integration by HDR at the human AAVS1 safe harbor locus. A minimal N-terminal fragment of CtIP, designated HE for HDR enhancer, is sufficient to stimulate HDR and this depends on CDK phosphorylation sites and the multimerization domain essential for CtIP activity in homologous recombination. HDR stimulation by Cas9–HE, however, depends on the guide RNA used, a limitation that may be overcome by testing multiple guides to the locus of interest. The Cas9–HE fusion is simple to use and allows obtaining twofold or more efficient transgene integration than that with Cas9 in several experimental systems, including human cell lines, iPS cells, and rat zygotes. The integration of exogenous DNA into the genome using CRISPR–Cas9 often presents a challenge to researchers. Here the authors fuse CtIP to Cas9 to stimulate recombination at target loci.
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DOI：
10.3109/10409238.2016.1172552
发表时间：
2016-05
影响因子：
6.5
作者：
Symington LS
通讯作者：
Symington LS
影响因子：
64.8
作者：
Komor AC;Kim YB;Packer MS;Zuris JA;Liu DR
通讯作者：
Liu DR
影响因子：
56.9
作者：
Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle
影响因子：
4.1
作者：
Lin, Lin;Petersen, Trine Skov;Luo, Yonglun
通讯作者：
Luo, Yonglun
DOI：
10.1084/jem.20131939
发表时间：
2014-06-02
期刊：
The Journal of experimental medicine
影响因子：
--
作者：
Polato F;Callen E;Wong N;Faryabi R;Bunting S;Chen HT;Kozak M;Kruhlak MJ;Reczek CR;Lee WH;Ludwig T;Baer R;Feigenbaum L;Jackson S;Nussenzweig A
通讯作者：
Nussenzweig A