Capturing Membrane Protein Ribosome Nascent Chain Complexes in a Native-like Environment for Co-translational Studies.
Capturing Membrane Protein Ribosome Nascent Chain Complexes in a Native-like Environment for Co-translational Studies.
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DOI：
10.1021/acs.biochem.0c00423
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发表时间：
2020-08-04
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Booth PJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Pellowe GA;Findlay HE;Lee K;Gemeinhardt TM;Blackholly LR;Reading E;Booth PJ
膜蛋白的共翻译折叠研究落后于胞质蛋白的调查，主要是由于在维持正确的蛋白质折叠的膜脂质环境的技术困难。停滞的核糖体结合的新生链复合物（RNCs）可以在生物合成过程中从核糖体中出现时提供新生蛋白质链的快照。在这里，我们展示了如何利用SecM促进新生链失速和原生纳米盘技术来捕获其原生脂质组合物中体内产生的膜蛋白RNC。我们揭示了一个多位膜蛋白可以成功地在其合成过程中的各个阶段停止，并在洗涤剂胶束或二异丁烯-马来酸共聚物天然纳米盘内提取所得RNC。我们的方法为特定长度的新生膜蛋白的结构和生物物理询问提供了易于处理的解决方案，因为伸长的新生链从核糖体中出现并插入其天然脂质环境中。
Co-translational folding studies of membrane proteins lag behind cytosolic protein investigations largely due to the technical difficulty in maintaining membrane lipid environments for correct protein folding. Stalled ribosome-bound nascent chain complexes (RNCs) can give snapshots of a nascent protein chain as it emerges from the ribosome during biosynthesis. Here, we demonstrate how SecM-facilitated nascent chain stalling and native nanodisc technologies can be exploited to capture in vivo-generated membrane protein RNCs within their native lipid compositions. We reveal that a polytopic membrane protein can be successfully stalled at various stages during its synthesis and the resulting RNC extracted within either detergent micelles or diisobutylene–maleic acid co-polymer native nanodiscs. Our approaches offer tractable solutions for the structural and biophysical interrogation of nascent membrane proteins of specified lengths, as the elongating nascent chain emerges from the ribosome and inserts into its native lipid milieu.
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影响因子：
14.8
作者：
Guo R;Gaffney K;Yang Z;Kim M;Sungsuwan S;Huang X;Hubbell WL;Hong H
通讯作者：
Hong H
DOI：
10.1126/science.1261909
发表时间：
2015-04-24
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Goldman DH;Kaiser CM;Milin A;Righini M;Tinoco I Jr;Bustamante C
通讯作者：
Bustamante C
影响因子：
4.6
作者：
Harris NJ;Reading E;Ataka K;Grzegorzewski L;Charalambous K;Liu X;Schlesinger R;Heberle J;Booth PJ
通讯作者：
Booth PJ
影响因子：
4.8
作者：
Dale, H;Krebs, MP
通讯作者：
Krebs, MP
影响因子：
16.6
作者：
Bischoff, Lukas;Wickles, Stephan;Beckmann, Roland
通讯作者：
Beckmann, Roland