Identifying Inhibitors of Inflammation: A Novel High-Throughput MALDI-TOF Screening Assay for Salt-Inducible Kinases (SIKs).
Identifying Inhibitors of Inflammation: A Novel High-Throughput MALDI-TOF Screening Assay for Salt-Inducible Kinases (SIKs).
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DOI：
10.1177/2472555217717473
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发表时间：
2017-12
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Trost M
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Heap RE;Hope AG;Pearson LA;Reyskens KMSE;McElroy SP;Hastie CJ;Porter DW;Arthur JSC;Gray DW;Trost M
基质辅助激光解吸/电离飞行时间(MALDI TOF)质谱仪由于具有快速、灵活、灵敏以及无需标记就能测量生理底物的能力，已成为高通量药物发现的一种有前途的替代方案。在这里，我们开发并应用高通量MALDI TOF质谱仪来鉴定盐诱导激酶(SIK)家族的抑制剂，这些抑制剂是炎症性疾病领域中有趣的药物靶点，因为它们控制巨噬细胞中抗炎细胞因子白介素10(IL-10)的产生。在体外激酶分析中使用多肽底物，我们可以证明MALDI TOF激酶分析的HIT鉴定与间接ADP-Hunter激酶分析相关。此外，我们可以证明，这两种技术都能为一些热门化合物和已知的SIK激酶抑制剂生成可比的IC50数据。我们进一步将这些抑制物用于基于荧光的细胞检测，使用依赖于SIK活性的CRTC3转位到细胞核中，从而为在体外和细胞内鉴定SIK激酶抑制物提供了一条完整的分析管道。我们的数据表明，MALDI TOF质谱仪完全适用于高通量的激酶筛选，提供的无标记数据可与目前的高通量荧光分析相媲美。
Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight (MALDI TOF) mass spectrometry has become a promising alternative for high-throughput drug discovery as new instruments offer high speed, flexibility and sensitivity, and the ability to measure physiological substrates label free. Here we developed and applied high-throughput MALDI TOF mass spectrometry to identify inhibitors of the salt-inducible kinase (SIK) family, which are interesting drug targets in the field of inflammatory disease as they control production of the anti-inflammatory cytokine interleukin-10 (IL-10) in macrophages. Using peptide substrates in in vitro kinase assays, we can show that hit identification of the MALDI TOF kinase assay correlates with indirect ADP-Hunter kinase assays. Moreover, we can show that both techniques generate comparable IC50 data for a number of hit compounds and known inhibitors of SIK kinases. We further take these inhibitors to a fluorescence-based cellular assay using the SIK activity-dependent translocation of CRTC3 into the nucleus, thereby providing a complete assay pipeline for the identification of SIK kinase inhibitors in vitro and in cells. Our data demonstrate that MALDI TOF mass spectrometry is fully applicable to high-throughput kinase screening, providing label-free data comparable to that of current high-throughput fluorescence assays.
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DOI：
10.1073/pnas.1412308111
发表时间：
2014-08-26
影响因子：
11.1
作者：
Sundberg, Thomas B.;Choi, Hwan Geun;Shamji, Alykhan F.
通讯作者：
Shamji, Alykhan F.
DOI：
10.1038/nrm3072
发表时间：
2011-03
期刊：
Nature reviews. Molecular cell biology
影响因子：
--
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
7.4
作者：
Krause, E;Wenschuh, H;Jungblut, PR
通讯作者：
Jungblut, PR
DOI：
10.1042/bcj20160646
发表时间：
2017-02-15
期刊：
The Biochemical journal
影响因子：
--
作者：
Darling NJ;Toth R;Arthur JS;Clark K
通讯作者：
Clark K
影响因子：
16.6
作者：
Patel, Kashyap;Foretz, Marc;Marion, Allison;Campbell, David G.;Gourlay, Robert;Boudaba, Nadia;Tournier, Emilie;Titchenell, Paul;Peggie, Mark;Deak, Maria;Wan, Min;Kaestner, Klaus H.;Goransson, Olga;Viollet, Benoit;Gray, Nathanael S.;Birnbaum, Morris J.;Sutherland, Calum;Sakamoto, Kei
通讯作者：
Sakamoto, Kei