全反式维A酸与骨形态发生蛋白联合应用对不同鼠源细胞骨 钙素及成骨相关基因表达的影响
全反式维A酸与骨形态发生蛋白联合应用对不同鼠源细胞骨 钙素及成骨相关基因表达的影响
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DOI：
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发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
毕文娟
中科院分区：
文献类型：
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作者：
沈晨曦;李米;李金源;毕文娟
目的 探讨全反式维A酸(ATRA)与骨形态发生蛋白(BMPs)单独或联合应用对小鼠成骨前体细胞.(MC3T3-E1)和大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的骨钙素(OCN)以及成骨相关基因ALP、OCN、Runx2表达的影响。.方法 传代培养MC3T3-E1细胞及BMSCs，分别经不同浓度细胞因子刺激培养后分为10个组：空白对照组、ATRA组、.5ng/ml BMP2/7组、50ng/ml BMP2/7组、5ng/ml BMP2组、50ng/ml BMP2组、ATRA+5ng/ml BMP2/7组、ATRA+50ng/ml.BMP2/7组、ATRA+5ng/ml BMP2组、ATRA+50ng/ml BMP2组，采用免疫荧光染色观察细胞形态，免疫酶联吸附实验.(ELISA)检测两种细胞OCN的表达，实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测ALP、OCN、Runx2基因的表达。结果. 免疫荧光染色观察结果显示，MC3T3-E1及BMSCs细胞生长状态良好，结构完整。单独应用ATRA可明显抑制两种细.胞(MC3T3-E1及BMSCs)的OCN表达，第7天尤为明显：MC3T3-E1细胞ATRA单独组[(20.97±0.31)ng/ml]明显低于空白.对照组[(33.45±0.55)ng/ml]，BMSCs细胞ATRA单独组[(9.90±0.16)ng/ml]也明显低于空白对照组[(14.30±0.53)ng/ml]，.差异均有统计学意义(P<0.05)。单独应用BMPs可浓度依赖性地促进细胞OCN表达，且BMP2/7促进作用更强，50ng/ml.BMP2/7作用后MC3T3-E1细胞的OCN浓度为(47.13±0.59)ng/ml，BMSCs的OCN浓度为(49.92±0.53)ng/ml，50ng/ml.BMP2/7能够完全拮抗ATRA对细胞OCN表达的抑制作用(P<0.05)。RT-qPCR检测结果显示，单独应用ATRA可明显抑.制MC3T3-E1细胞ALP、OCN基因的表达，但可促进Runx2基因的表达(P<0.05)，单独应用BMPs呈浓度依赖性地促进.MC3T3-E1细胞成骨相关基因的表达(P<0.05)，ATRA可显著抑制BMPs对OCN基因表达的促进作用，但ATRA与50ng/ml.BMP2/7可协同促进ALP基因的表达(P<0.05)；单独应用ATRA第7天可显著促进BMSCs Runx2基因的表达，但可抑制.ALP、OCN基因的表达(P<0.05)，50ng/ml BMPs可显著促进BMSCs ALP、Runx2基因的表达(P<0.05)，50ng/ml BMP2/7.可拮抗ATRA对ALP基因表达的抑制作用并促进其表达(P<0.05)。结论 单独应用ATRA可抑制细胞OCN蛋白的表达，抑.制细胞ALP、OCN基因的表达；BMP2/7可显著促进细胞OCN蛋白的表达，BMPs可促进成骨相关基因的表达；50ng/ml.BMP2/7可完全拮抗ATRA对细胞的成骨抑制作用。