芒果MiFTs基因家族克隆及其酵母双杂诱饵载体的构建
芒果MiFTs基因家族克隆及其酵母双杂诱饵载体的构建
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DOI：
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发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
何新华
中科院分区：
文献类型：
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作者：
樊琰;罗聪;王逸涵;余海霞;莫啸;范志毅;何新华
成花诱导是开花植物生长发育过程中最为重要的一环,而开花整合因子Flowering Locus T (FT)在这一过程中起非常重要的调控作用。目前,FT基因调控芒果成花的作用机制尚不清楚。本研究以‘四季蜜芒’为材料,克隆验证了从转录组测序数据中挖掘获得的3个FT同源基因,命名为MiFT1、MiFT2和MiFT3。生物信息学分析显示,3个MiFTs基因编码区长度分别为588 bp、540 bp和516 bp,分别编码氨基酸196个、180个和172个,分子量分别为48.97 kD、44.71 kD和42.27 kD,等电点分别为4.99、5.06和5.06,3个基因均含有一个保守的PEBP结构域。将MiFT1、MiFT2和MiFT3基因定向克隆到酵母表达载体pGBKT7上,通过菌落PCR和测序进行验证,并成功转化酵母菌株Y2H Gold感受态细胞。对诱饵质粒酵母菌进行自激活和毒性检测,发现pGBKT7-MiFT1、pGBKT7-MiFT2和pGBKT7-MiFT3在酵母菌种均不具备自激活性和毒性。此酵母诱饵蛋白表达载体被成功构建,为后续蛋白互作筛选提供参考。