A cautionary note on the use of split-YFP/BiFC in plant protein-protein interaction studies.
A cautionary note on the use of split-YFP/BiFC in plant protein-protein interaction studies.
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DOI：
10.3390/ijms15069628
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发表时间：
2014-05-30
影响因子：
5.6
通讯作者：
Immink RG
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Horstman A;Tonaco IA;Boutilier K;Immink RG
自10年前引入植物以来，双分子荧光互补（BiFC）方法，或分裂- yfp（黄色荧光蛋白），作为一种研究蛋白质-蛋白质相互作用的方法，在植物生物学领域得到了广泛的应用。BiFC是基于一个荧光蛋白的两个非荧光半部分通过蛋白质-蛋白质相互作用事件聚集在一起后的荧光恢复。BiFC的主要缺点是荧光蛋白的一半倾向于独立于蛋白质相互作用事件的自组装。为了避免这个问题，已经提出了对该技术的几种修改，但这些修改并没有导致工厂BiFC协议的改进。因此，包括适当的内部控制仍然至关重要。我们对最近植物中bbic研究的文献调查表明，大多数研究使用了不适当的对照，并且荧光的定性而非定量读取。因此，我们提供了一个警告说明和初学者的指导原则，建立BiFC实验，讨论协议的每个步骤，包括载体选择，植物表达系统，阴性对照和信号检测。此外，我们介绍了我们的经验，与自组装，肽连接和孵育温度方面的BiFC。本文旨在为提高植物bic实验质量提供指导。
Since its introduction in plants 10 years ago, the bimolecular fluorescence complementation (BiFC) method, or split-YFP (yellow fluorescent protein), has gained popularity within the plant biology field as a method to study protein-protein interactions. BiFC is based on the restoration of fluorescence after the two non-fluorescent halves of a fluorescent protein are brought together by a protein-protein interaction event. The major drawback of BiFC is that the fluorescent protein halves are prone to self-assembly independent of a protein-protein interaction event. To circumvent this problem, several modifications of the technique have been suggested, but these modifications have not lead to improvements in plant BiFC protocols. Therefore, it remains crucial to include appropriate internal controls. Our literature survey of recent BiFC studies in plants shows that most studies use inappropriate controls, and a qualitative rather than quantitative read-out of fluorescence. Therefore, we provide a cautionary note and beginner’s guideline for the setup of BiFC experiments, discussing each step of the protocol, including vector choice, plant expression systems, negative controls, and signal detection. In addition, we present our experience with BiFC with respect to self-assembly, peptide linkers, and incubation temperature. With this note, we aim to provide a guideline that will improve the quality of plant BiFC experiments.
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影响因子：
--
作者：
Fang, Yuda;Spector, David L
通讯作者：
Spector, David L
影响因子：
1.6
作者：
Park, Mi-Ri;Kim, Kook-Hyung
通讯作者：
Kim, Kook-Hyung
影响因子：
2.9
作者：
Busso, D;Delagoutte-Busso, B;Moras, D
通讯作者：
Moras, D
DOI：
10.1093/protein/14.8.529
发表时间：
2001-08-01
期刊：
PROTEIN ENGINEERING
影响因子：
--
作者：
Arai, R;Ueda, H;Nagamune, T
通讯作者：
Nagamune, T
影响因子：
2.7
作者：
Kodama, Yutaka;Hu, Chang-Deng
通讯作者：
Hu, Chang-Deng