The myotonic dystrophy type 2 protein ZNF9 is part of an ITAF complex that promotes cap-independent translation
The myotonic dystrophy type 2 protein ZNF9 is part of an ITAF complex that promotes cap-independent translation
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DOI：
10.1074/mcp.m600384-mcp200
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发表时间：
2007-06-01
影响因子：
7
通讯作者：
Link, Andrew J.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Gerbasi, Vincent R.;Link, Andrew J.
鸟氨酸脱羧酶 (ODC) mRNA 的 5'-非翻译区包含内部核糖体进入位点 (IRES)。 ODC IRES 的突变分析确定了 ODC mRNA 不依赖帽的翻译所需的序列。为了发现新的 IRES 反式作用因子 (ITAF)，我们使用野生型 ODC mRNA 和具有无活性 IRES 的突变版本对调节 ODC 翻译的蛋白质进行了蛋白质组学筛选。我们鉴定了两种与野生型 ODC IRES 相关的 RNA 结合蛋白，但与突变型 IRES 不相关。其中一种 RNA 结合蛋白 PCBP2 是病毒和细胞 IRES 的既定激活剂。第二种蛋白 ZNF9（强直性肌营养不良 2 型蛋白）此前并未被证明可以与 IRES 样元件结合。通过一系列生化测定，我们验证了这些蛋白质与 ODC mRNA 的相互作用。有趣的是，ZNF9 和 PCBP2 在生化上相互关联，并且似乎作为更大的 Holo-ITAF 核糖核蛋白复合物的一部分发挥作用。我们的功能研究表明 PCBP2 和 ZNF9 刺激 ODC IRES 的翻译。重要的是，这些结果可能有助于深入了解 ZNF9 的正常作用以及为什么 ZNF9 突变会导致强直性肌营养不良。
The 5'-untranslated region of the ornithine decarboxylase (ODC) mRNA contains an internal ribosomal entry site (IRES). Mutational analysis of the ODC IRES has led to the identification of sequences necessary for cap-independent translation of the ODC mRNA. To discover novel IRES trans-acting factors (ITAFs), we performed a proteomics screen for proteins that regulate ODC translation using the wild-type ODC mRNA and a mutant version with an inactive IRES. We identified two RNA-binding proteins that associate with the wild-type ODC IRES but not the mutant IRES. One of these RNA-binding proteins, PCBP2, is an established activator of viral and cellular IRESs. The second protein, ZNF9 (myotonic dystrophy type 2 protein), has not been shown previously to bind IRES-like elements. Using a series of biochemical assays, we validated the interaction of these proteins with ODC mRNA. Interestingly ZNF9 and PCBP2 biochemically associated with each other and appeared to function as part of a larger holo-ITAF ribonucleoprotein complex. Our functional studies showed that PCBP2 and ZNF9 stimulate translation of the ODC IRES. Importantly these results may provide insight into the normal role of ZNF9 and why ZNF9 mutations cause myotonic dystrophy.