Mutation of the arginine finger in the active site of Escherichia coli DbpA abolishes ATPase and helicase activity and confers a dominant slow growth phenotype.
Mutation of the arginine finger in the active site of Escherichia coli DbpA abolishes ATPase and helicase activity and confers a dominant slow growth phenotype.
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DOI：
10.1093/nar/gkm926
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发表时间：
2008-01
影响因子：
14.9
通讯作者：
Uhlenbeck, Olke C.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Elles, Lisa M. Sharpe;Uhlenbeck, Olke C.
大肠杆菌 DEAD-box 蛋白 A (DbpA) 是一种 ATP 依赖性 RNA 解旋酶，对 23S 核糖体 RNA 具有特异性。尽管 DbpA 已在生化方面得到了广泛的表征，但其生物学功能仍然未知。先前的工作表明，DbpA 缺失菌株是可行的，对生长速度影响很小或没有影响。为了阐明 DbpA 的表型，在 ATP 酶活性位点的 11 个保守残基上进行了点突变，这些点突变在其他 DExD/H 蛋白中表现出显性失活表型。这些 DbpA 突变体的生化分析显示，RNA 依赖性 ATP 酶活性和螺旋解旋活性出现了预期的降低。只有生化活性最低的突变 R331A 会产生较小的集落表型并降低生长速度。这种显性的缓慢生长突变体对于确定 DbpA 的细胞功能非常有价值。
Escherichia coli DEAD-box protein A (DbpA) is an ATP-dependent RNA helicase with specificity for 23S ribosomal RNA. Although DbpA has been extensively characterized biochemically, its biological function remains unknown. Previous work has shown that a DbpA deletion strain is viable with little or no effect on growth rate. In attempt to elucidate a phenotype for DbpA, point mutations were made at eleven conserved residues in the ATPase active site, which have exhibited dominant-negative phenotypes in other DExD/H proteins. Biochemical analysis of these DbpA mutants shows the expected decrease in RNA-dependent ATPase activity and helix unwinding activity. Only the least biochemically active mutation, R331A, produces small colony phenotype and a reduced growth rate. This dominant slow growth mutant will be valuable to determine the cellular function of DbpA.
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DOI：
10.1073/pnas.97.24.13080
发表时间：
2000-11-21
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