Single particle fluorescence burst analysis of epsin induced membrane fission.
Single particle fluorescence burst analysis of epsin induced membrane fission.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0119563
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发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Rye HS
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Brooks A;Shoup D;Kustigian L;Puchalla J;Carr CM;Rye HS
从细胞生长到突触传递的重要细胞过程依赖于膜结合载体和囊泡将分子货物运输到整个细胞的特定细胞内区室和从特定细胞内区室运输分子货物。最后一步，膜分裂，从细胞内区室释放运输载体，需要区室特异性蛋白质。裂变蛋白的作用，特别是在细胞内的位置和在非神经元细胞，而通知发动蛋白-1范式，仍有待解决。在这项研究中，我们介绍了一种高灵敏度的方法来识别和分析膜裂变机制，称为突发分析光谱（BAS）。BAS是一种单粒子、自由溶液方法，非常适合于膜动力学的定量测量。在这里，我们使用BAS分析膜分裂诱导的有效的，分裂活性ENTH域的epsin。使用这种方法，我们得到了温度依赖性，时间分辨测量脂质体的大小和浓度的变化，即使在亚微摩尔浓度的epsin ENTH域。我们还发现，在37°C下，全长epsin蛋白的分裂活性，支持用ENTH结构域观察到的膜分裂活性代表全长epsin蛋白的天然功能的论点。
Vital cellular processes, from cell growth to synaptic transmission, rely on membrane-bounded carriers and vesicles to transport molecular cargo to and from specific intracellular compartments throughout the cell. Compartment-specific proteins are required for the final step, membrane fission, which releases the transport carrier from the intracellular compartment. The role of fission proteins, especially at intracellular locations and in non-neuronal cells, while informed by the dynamin-1 paradigm, remains to be resolved. In this study, we introduce a highly sensitive approach for the identification and analysis of membrane fission machinery, called burst analysis spectroscopy (BAS). BAS is a single particle, free-solution approach, well suited for quantitative measurements of membrane dynamics. Here, we use BAS to analyze membrane fission induced by the potent, fission-active ENTH domain of epsin. Using this method, we obtained temperature-dependent, time-resolved measurements of liposome size and concentration changes, even at sub-micromolar concentration of the epsin ENTH domain. We also uncovered, at 37°C, fission activity for the full-length epsin protein, supporting the argument that the membrane-fission activity observed with the ENTH domain represents a native function of the full-length epsin protein.
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影响因子：
9.8
作者：
Loerke D;Mettlen M;Yarar D;Jaqaman K;Jaqaman H;Danuser G;Schmid SL
通讯作者：
Schmid SL
DOI：
10.1038/nrm2937
发表时间：
2010-08
期刊：
Nature reviews. Molecular cell biology
影响因子：
--
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
64.5
作者：
Boucrot E;Pick A;Çamdere G;Liska N;Evergren E;McMahon HT;Kozlov MM
通讯作者：
Kozlov MM
影响因子：
64.5
作者：
Lee, MCS;Orci, L;Schekman, R
通讯作者：
Schekman, R
影响因子：
4
作者：
Legendre-Guillemin, V;Wasiak, S;McPherson, PS
通讯作者：
McPherson, PS