Phage p1-derived artificial chromosomes facilitate heterologous expression of the FK506 gene cluster.
Phage p1-derived artificial chromosomes facilitate heterologous expression of the FK506 gene cluster.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0069319
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发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Bibb MJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Jones AC;Gust B;Kulik A;Heide L;Buttner MJ;Bibb MJ
我们描述了将含有大型天然产物基因簇（≥70 kilobase）的噬菌体 P1 衍生的人工染色体（PAC）文库克隆接合转移至天蓝色链霉菌菌株的程序，该菌株经过工程改造，可改善天然产物的异源生产。这种方法使用 FK506（他克莫司）的基因簇进行了演示，FK506 是一种具有高商业价值的临床重要免疫抑制剂。将存在于一个 130 kb PAC 克隆中的来自筑波链霉菌 NRRL 18488 的完整 83.5 kb FK506 基因簇引入四种不同的天蓝色链霉菌衍生物中，并且全部产生 FK506 和少量的相关化合物 FK520。在含有 FK506 PAC 的天蓝色链球菌 M1146 中，FK506 LuxR 调控基因 fkbN 过表达后，FK506 产量增加约五倍（从 1.2 mg L-1 至 5.5 mg L-1）。这里描述的基于 PAC 的基因簇缀合方法提供了一种易于处理的方法来评估和操作 FK506 生物合成，并且很容易适用于编码医学、农业和生物技术感兴趣的天然产物的其他大型基因簇。
We describe a procedure for the conjugative transfer of phage P1-derived Artificial Chromosome (PAC) library clones containing large natural product gene clusters (≥70 kilobases) to Streptomyces coelicolor strains that have been engineered for improved heterologous production of natural products. This approach is demonstrated using the gene cluster for FK506 (tacrolimus), a clinically important immunosuppressant of high commercial value. The entire 83.5 kb FK506 gene cluster from Streptomyces tsukubaensis NRRL 18488 present in one 130 kb PAC clone was introduced into four different S. coelicolor derivatives and all produced FK506 and smaller amounts of the related compound FK520. FK506 yields were increased by approximately five-fold (from 1.2 mg L-1 to 5.5 mg L-1) in S. coelicolor M1146 containing the FK506 PAC upon over-expression of the FK506 LuxR regulatory gene fkbN. The PAC-based gene cluster conjugation methodology described here provides a tractable means to evaluate and manipulate FK506 biosynthesis and is readily applicable to other large gene clusters encoding natural products of interest to medicine, agriculture and biotechnology.
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影响因子：
3.2
作者：
Erb, Annette;Luzhetskyy, Andriy;Bechthold, Andreas
通讯作者：
Bechthold, Andreas
影响因子：
2.9
作者：
Kim, Jeffrey H.;Feng, Zhiyang;Bauer, John D.;Kallifidas, Dimitris;Calle, Paula Y.;Brady, Sean F.
通讯作者：
Brady, Sean F.
影响因子：
2.9
作者：
Flinspach, Katrin;Westrich, Lucia;Heide, Lutz
通讯作者：
Heide, Lutz
DOI：
10.1073/pnas.0337542100
发表时间：
2003-02-18
影响因子：
11.1
作者：
Gust, B;Challis, GL;Chater, KF
通讯作者：
Chater, KF
影响因子：
3.2
作者：
Binz, Tina M.;Wenzel, Silke C.;Mueller, Rolf
通讯作者：
Mueller, Rolf