Targeted Disruption of V600E-Mutant BRAF Gene by CRISPR-Cpf1.
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DOI：
10.1016/j.omtn.2017.05.009
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发表时间：
2017-09-15
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Tong A
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Yang M;Wei H;Wang Y;Deng J;Tang Y;Zhou L;Guo G;Tong A
BRAF-V600 E（1799 T> A）是多种类型癌症中最常报告的驱动突变之一，具有此类突变的患者可以从选择性失活突变等位基因中获益。在该突变位点附近，分别存在Cpf 1和Cas9 CRISPR核酸酶的两个TTTN和一个NGG前间隔区邻近基序（PAM）。1799 T> A取代还导致Cas9的EQR变体的新NGNG PAM的出现。我们检查了Cpf 1、Cas9和EQR变体对该突变位点的编辑功效和选择性。只有Cpf 1表现出强大的活性，诱导特异性破坏的突变体BRAF，而不是野生型序列。Cas9识别并切割正常和突变等位基因，并且使用EQR变体没有观察到明显的基因编辑事件。我们的研究结果支持Cpf 1通过高度特异性灭活许多其他功能获得性突变在精准医学中的潜在适用性。
BRAF-V600E (1799T > A) is one of the most frequently reported driver mutations in multiple types of cancers, and patients with such mutations could benefit from selectively inactivating the mutant allele. Near this mutation site, there are two TTTN and one NGG protospacer-adjacent motifs (PAMs) for Cpf1 and Cas9 CRISPR nucleases, respectively. The 1799T > A substitution also leads to the occurrence of a novel NGNG PAM for the EQR variant of Cas9. We examined the editing efficacy and selectivity of Cpf1, Cas9, and EQR variant to this mutation site. Only Cpf1 demonstrated robust activity to induce specific disruption of only mutant BRAF, not wild-type sequence. Cas9 recognized and cut both normal and mutant alleles, and no obvious gene editing events were observed using EQR variant. Our results support the potential applicability of Cpf1 in precision medicine through highly specific inactivation of many other gain-of-function mutations.
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