Optimization and troubleshooting in PCR.
Optimization and troubleshooting in PCR.
复制标题
PCR 中的优化和故障排除。
DOI：
10.1101/gr.4.5.s185
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发表时间：
1995
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Kenneth H. Roux
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kenneth H. Roux
使用聚合酶链式反应（PCR）来产生大量的所需产物可能是一把双刃剑。未能在最佳条件下扩增可能导致产生多种不确定和不需要的产物，甚至排除所需的产物。在另一个极端，没有产品可以生产。此时的典型反应是改变已知有助于引物-模板保真度和引物延伸的许多参数中的一个或多个。优化变量列表中的高值是Mg浓度、缓冲液pH和循环条件。至于最后，退火温度是最重要的。由于有些变数相互依存，情况更加复杂。例如，因为dNTP直接螯合成比例数量的Mg离子，所以dNTP浓度的增加降低了可用于影响聚合酶功能的游离Mg的浓度。本文讨论了各种优化策略，包括降落PCR和热启动PCR。
The use of polymerase chain reaction (PCR) to generate large amounts of a desired product can be a double-edged sword. Failure to amplify under optimum conditions can lead to the generation of multiple undefined and unwanted products, even to the exclusion of the desired product. At the other extreme, no product may be produced. A typical response at this point is to vary one or more of the many parameters that are known to contribute to primer-template fidelity and primer extension. High on the list of optimization variables are Mg concentrations, buffer pH, and cycling conditions. With regard to the last, the annealing temperature is most important. The situation is further complicated by the fact that some of the variables are quite interdependent. For example, because dNTPs directly chelate a proportional number of Mg ions, an increase in the concentration of dNTPs decreases the concentration of free Mg available to influence polymerase function. This article discusses various optimization strategies, including touchdown PCR and hot-start PCR.
影响因子：
2.7
作者：
E. Beutler;T. Gelbart;Wanda Kuhl
通讯作者：
E. Beutler;T. Gelbart;Wanda Kuhl
石蜡珠可以代替矿物油作为 PCR 中的蒸发屏障。
影响因子：
2.7
作者：
Wainwright,LA;Seifert,HS
通讯作者：
Seifert,HS
使用在简并氨基酸密码子的模糊位置含有脱氧肌苷的混合引物对大肠杆菌基因进行 PCR 扩增。
影响因子：
14.9
作者：
Patil,RV;Dekker,EE
通讯作者：
Dekker,EE