Rapid inactivation of proteins by rapamycin-induced rerouting to mitochondria.
Rapid inactivation of proteins by rapamycin-induced rerouting to mitochondria.
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DOI：
10.1016/j.devcel.2009.12.015
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发表时间：
2010-02-16
影响因子：
11.8
通讯作者：
Foster SD
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Robinson MS;Sahlender DA;Foster SD
我们开发了一种通过雷帕霉素诱导的异二聚化快速灭活蛋白质的方法。细胞被网格蛋白包被的囊泡 (CCV) 的接头蛋白 (AP) 复合物的 siRNA 抗性、FKBP 标记亚基以及含有 FKBP 和雷帕霉素结合结构域（具有线粒体靶向信号）的构建体稳定转染。用 siRNA 敲除内源亚基，然后添加雷帕霉素，导致 AP 在几秒钟内重新路由至线粒体。将 AP-2 重新路由至线粒体可有效消除网格蛋白介导的转铁蛋白内吞作用。在 AP-1 改道的细胞中，内吞的阳离子非依赖性甘露糖 6-磷酸受体 (CIMPR) 在外周室中积累，分离的 CCV 的 CIMPR 水平降低，但溶酶体水解酶 DNase II 水平正常。这两项观察结果都支持 AP-1 在逆行贩运中的作用。这种类型的方法，我们称之为“knocksideways”，应该广泛适用，作为一种在几秒或几分钟而不是几天的时间内灭活蛋白质的方法。 ► 我们开发了一种快速去除蛋白质的方法（即几分钟而不是几天） ► 这种方法为外壳蛋白 AP-1 的功能提供了新的见解
We have developed a method for rapidly inactivating proteins with rapamycin-induced heterodimerization. Cells were stably transfected with siRNA-resistant, FKBP-tagged subunits of the adaptor protein (AP) complexes of clathrin-coated vesicles (CCVs), together with an FKBP and rapamycin-binding domain-containing construct with a mitochondrial targeting signal. Knocking down the endogenous subunit with siRNA, and then adding rapamycin, caused the APs to be rerouted to mitochondria within seconds. Rerouting AP-2 to mitochondria effectively abolished clathrin-mediated endocytosis of transferrin. In cells with rerouted AP-1, endocytosed cation-independent mannose 6-phosphate receptor (CIMPR) accumulated in a peripheral compartment, and isolated CCVs had reduced levels of CIMPR, but normal levels of the lysosomal hydrolase DNase II. Both observations support a role for AP-1 in retrograde trafficking. This type of approach, which we call a “knocksideways,” should be widely applicable as a means of inactivating proteins with a time scale of seconds or minutes rather than days. ► We have developed a way of getting rid of proteins quickly (i.e., minutes not days) ► This approach provides new insights into the function of the coat protein AP-1
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DOI：
10.1083/jcb.131.1.69
发表时间：
1995-10
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Damke H;Baba T;van der Bliek AM;Schmid SL
通讯作者：
Schmid SL
影响因子：
11.4
作者：
Meyer, C;Zizioli, D;Schu, P
通讯作者：
Schu, P
影响因子：
11.8
作者：
Macia, Eric;Ehrlich, Marcelo;Kirchhausen, Tomas
通讯作者：
Kirchhausen, Tomas
DOI：
10.1073/pnas.93.10.4604
发表时间：
1996-05-14
影响因子：
11.1
作者：
Belshaw, PJ;Ho, SN;Schreiber, SL
通讯作者：
Schreiber, SL
影响因子：
64.5
作者：
Bear, JE;Loureiro, JJ;Gertler, FB
通讯作者：
Gertler, FB