Single Extracellular Vesicle Protein Analysis Using Immuno-Droplet Digital Polymerase Chain Reaction Amplification.
Single Extracellular Vesicle Protein Analysis Using Immuno-Droplet Digital Polymerase Chain Reaction Amplification.
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DOI：
10.1002/adbi.201900307
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发表时间：
2020-12
影响因子：
4.1
通讯作者：
Weissleder R
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ko J;Wang Y;Carlson JCT;Marquard A;Gungabeesoon J;Charest A;Weitz D;Pittet MJ;Weissleder R
需要新的分析技术来研究单个细胞外囊泡（EV）的组成。需要这些技术来提高我们对异质EV群体的理解，允许识别独特的亚群体，并实现更早和更敏感的疾病检测。由于电动汽车体积小，蛋白质含量低，因此需要超高灵敏度技术。在这里，我们描述了一种免疫液滴数字PCR （iddPCR）扩增方法，允许多重单一EV蛋白分析。抗体- dna偶联物用于标记EV，然后随机微流体将单个EV纳入液滴中。荧光报告探针的原位PCR转换和放大条形码信号，随后通过液滴成像读出。在这些原理验证研究中，表明在单个EV中可以进行多重蛋白分析，为未来的分析打开了大门。建立了一种免疫液滴数字PCR （iddPCR）方法，用于多路单EV蛋白分析。抗体- dna缀合物用于标记EV，标记的单个EV被封装成液滴。使用PCR， DNA条形码被扩增用于基于成像的读出。这表明在单个EV中多重蛋白分析是可能的，为未来的分析打开了大门。
There is a need for novel analytical techniques to study the composition of single extracellular vesicles (EV). Such techniques are required to improve our understanding of heterogenous EV populations, to allow identification of unique subpopulations, and to enable earlier and more sensitive disease detection. Because of the small size of EV and their low protein content, ultra-high sensitivity technologies are required. Here we describe an immuno-droplet digital PCR (iddPCR) amplification method that allows multiplexed single EV protein profiling. Antibody-DNA conjugates are used to label EV, followed by stochastic microfluidic incorporation of single EV into droplets. In situ PCR with fluorescent reporter probes converts and amplifies the barcode signal for subsequent read-out by droplet imaging. In these proof-of-principle studies it is shown that multiplex protein analysis is possible in single EV, opening the door for future analyses. An immuno droplet digital PCR (iddPCR) method has been developed for multiplexed single EV protein profiling. Antibody-DNA conjugates are used to label EV and labeled single EV are encapsulated into droplets. Using PCR, DNA barcodes are amplified for imaging based readout. It has shown that multiplex protein analysis is possible in single EV, opening the door for future analyses.
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