棘阿米巴HSP20蛋白的原核表达及免疫原性鉴定
棘阿米巴HSP20蛋白的原核表达及免疫原性鉴定
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DOI：
10.13350/j.cjpb.201109
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发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
时文艳
中科院分区：
文献类型：
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作者：
王宁宁;郑文彧;孙宏宇;王月华;李婷婷;韩漫漫;曲寿月;冯宪敏;时文艳
目的重组表达棘阿米巴热休克蛋白20(Heat shock protein 20,HSP20),并对HSP20作为疫苗候选分子的免疫活性进行验证。方法以棘阿米巴滋养体cDNA为模板,PCR扩增HSP20基因,构建pET-22b-HSP20原核表达载体,并将其转化大肠杆菌感受态细胞BL21;采用1mmol/L IPTG诱导重组HSP20蛋白(Recombinant heat shock protein 20,r- HSP20)表达,并进行可溶性分析。采用His亲和层析法纯化r-HSP20,并免疫家兔制备兔多克隆抗体;采用ELISA试剂盒检测多克隆抗体IgG1及IgG2a分型;Western blot鉴定r-HSP20的免疫反应性。结果经PCR扩增得到579bp的目的基因片段,与预期大小一致;经菌落PCR及双酶切证明成功构建pET22b-HSP20原核表达载体;经可溶性分析r-HSP20主要存在于重组菌超声破碎上清中;经SDS-PAGE鉴定柱层析300mmol/L咪唑洗脱的蛋白为高纯度r-HSP20;用该蛋白免疫获得的兔多克隆抗体效价为1∶12 800,其抗体亚型IgG1及IgG2a含量分别为183.8mg/ml和21.4mg/ml;Western blot鉴定r-HSP20能被兔多克隆抗体识别。结论成功构建pET-22b-HSP20原核表达载体,获得高纯度r-HSP20蛋白。抗体分型检测证明r-HSP20具有高效诱导体液免疫应答和细胞免疫应答的免疫原性,并具有良好的免疫反应性。