One-step generation of mice carrying mutations in multiple genes by CRISPR/Cas-mediated genome engineering.
One-step generation of mice carrying mutations in multiple genes by CRISPR/Cas-mediated genome engineering.
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DOI：
10.1016/j.cell.2013.04.025
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发表时间：
2013-05-09
期刊：
影响因子：
64.5
通讯作者：
Jaenisch R
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Wang H;Yang H;Shivalila CS;Dawlaty MM;Cheng AW;Zhang F;Jaenisch R
携带多个基因突变的小鼠传统上是通过胚胎干细胞中的顺序重组和/或具有单个突变的小鼠的耗时的杂交产生的。CRISPR/Cas系统已被改编为一种有效的基因靶向技术，具有多重基因组编辑的潜力。我们证明了CRISPR/Cas介导的基因编辑可以高效地同时破坏小鼠胚胎干（ES）细胞中的五个基因（Tet 1，2，3，Sry，Uty - 8等位基因）。将Cas9 mRNA和靶向Tet 1和Tet 2的单向导RNA（sgRNA）共注射到受精卵中产生了在两个基因中具有双等位基因突变的小鼠，效率为80%。最后，我们证明了Cas9 mRNA/sgRNA与突变寡核苷酸的共注射在两个靶基因中同时产生精确的点突变。因此，CRISPR/Cas系统允许一步生成携带多个基因突变的动物，这种方法将大大加速功能冗余基因和上位基因相互作用的体内研究。
Mice carrying mutations in multiple genes are traditionally generated by sequential recombination in embryonic stem cells and/or time-consuming intercrossing of mice with a single mutation. The CRISPR/Cas system has been adapted as an efficient gene-targeting technology with the potential for multiplexed genome editing. We demonstrate that CRISPR/Cas-mediated gene editing allows the simultaneous disruption of five genes (Tet1, 2, 3, Sry, Uty - 8 alleles) in mouse embryonic stem (ES) cells with high efficiency. Coinjection of Cas9 mRNA and single-guide RNAs (sgRNAs) targeting Tet1 and Tet2 into zygotes generated mice with biallelic mutations in both genes with an efficiency of 80%. Finally, we show that coinjection of Cas9 mRNA/sgRNAs with mutant oligos generated precise point mutations simultaneously in two target genes. Thus, the CRISPR/Cas system allows the one-step generation of animals carrying mutations in multiple genes, an approach that will greatly accelerate the in vivo study of functionally redundant genes and of epistatic gene interactions.
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影响因子：
23.9
作者：
Dawlaty, Meelad M.;Ganz, Kibibi;Powell, Benjamin E.;Hu, Yueh-Chiang;Markoulaki, Styliani;Cheng, Albert W.;Gao, Qing;Kim, Jongpil;Choi, Sang-Woon;Page, David C.;Jaenisch, Rudolf
通讯作者：
Jaenisch, Rudolf
DOI：
10.1016/j.tig.2008.08.007
发表时间：
2008-11
期刊：
Trends in genetics : TIG
影响因子：
--
作者：
McVey M;Lee SE
通讯作者：
Lee SE
影响因子：
11.8
作者：
Dawlaty, Meelad M.;Breiling, Achim;Le, Thuc;Raddatz, Guenter;Barrasa, M. Inmaculada;Cheng, Albert W.;Gao, Qing;Powell, Benjamin E.;Li, Zhe;Xu, Mingjiang;Faull, Kym F.;Lyko, Frank;Jaenisch, Rudolf
通讯作者：
Jaenisch, Rudolf
影响因子：
56.9
作者：
Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle
DOI：
10.1073/pnas.1009424107
发表时间：
2010-08-24
影响因子：
11.1
作者：
Meyer, Melanie;de Angelis, Martin Hrabe;Kuehn, Ralf
通讯作者：
Kuehn, Ralf