Binding of the N-terminal fragment C0-C2 of cardiac MyBP-C to cardiac F-actin.
Binding of the N-terminal fragment C0-C2 of cardiac MyBP-C to cardiac F-actin.
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DOI：
10.1016/j.jsb.2010.12.003
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发表时间：
2011-04
影响因子：
3
通讯作者：
Harris, Samantha P.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kensler, Robert W.;Shaffer, Justin F.;Harris, Samantha P.
心肌肌球蛋白结合蛋白C（cMyBP-C）是心肌粗丝的主要辅助蛋白，在心肌收缩调节中起重要作用。虽然目前的模型的蛋白质的功能集中在其结合肌球蛋白S2，其他证据表明，它也可以结合F-肌动蛋白。我们以前已经表明，N-末端片段C 0-C2的心肌肌球蛋白结合蛋白-C（cMyBP-C）束肌动蛋白，提供证据cMyBP-C和肌动蛋白的相互作用。本文采用负染和电镜技术直接研究了生理离子强度和pH条件下C 0-C2与F-肌动蛋白的相互作用。我们将C 0-C2（5 - 30 µM，在含有180 KCl、1 MgCl 2、1 EDTA、1 DTT、20咪唑（mM）的缓冲液中，pH 7.4）与F-肌动蛋白（5 µM）孵育30 min，并通过电子显微镜（EM）检查溶液的负染色样品。EM图像的检查显示，C 0-C2结合到F-肌动蛋白形成长螺旋有序复合物。傅立叶变换表明，C 0-C2与肌动蛋白的螺旋周期性结合，具有较强的第一和第六层线。这些结果为cMyBP-C的N-末端可以与F-肌动蛋白以周期性复合物的形式结合提供了直接证据。cMyBP-C与F-肌动蛋白的这种相互作用支持了cMyBP-C与F-肌动蛋白的结合可能在心脏收缩的调节中起作用的可能性
Cardiac myosin binding protein C (cMyBP-C), a major accessory protein of cardiac thick filaments, is thought to play a key role in the regulation of myocardial contraction. Although current models for the function of the protein focus on its binding to myosin S2, other evidence suggests that it may also bind to F-actin. We have previously shown that the N-terminal fragment C0–C2 of cardiac myosin binding protein-C (cMyBP-C) bundles actin, providing evidence for interaction of cMyBP-C and actin. In this paper we directly examined the interaction between C0–C2 and F-actin at physiological ionic strength and pH by negative staining and electron microscopy. We incubated C0–C2 (5 – 30 µM, in a buffer containing in mM: 180 KCl, 1 MgCl2, 1 EDTA, 1 DTT, 20 imidazole, at pH 7.4) with F-actin (5 µM) for 30 min and examined negatively-stained samples of the solution by electron microscopy (EM). Examination of EM images revealed that C0–C2 bound to F-actin to form long helically-ordered complexes. Fourier transforms indicated that C0–C2 binds with the helical periodicity of actin with strong 1st and 6th layer lines. The results provide direct evidence that the N-terminus of cMyBP-C can bind to F-actin in a periodic complex. This interaction of cMyBP-C with F-actin supports the possibility that binding of cMyBP-C to F-actin may play a role in the regulation of cardiac contraction
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