Time-resolved multifocal multiphoton microscope for high speed FRET imaging in vivo.
Time-resolved multifocal multiphoton microscope for high speed FRET imaging in vivo.
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用于体内高速 FRET 成像的时间分辨多焦点多光子显微镜。
作者：
S. Poland;N. Krstajić;Simao Coelho;D. Tyndall;R. Walker;V. Devauges;P. Morton;N. S. Nicholas;J. Richardson;D. Li;K. Suhling;C. Wells;M. Parsons;R. Henderson;S. Ameer
成像蛋白质在体内的时空相互作用对于理解生物系统的复杂性至关重要。使用荧光寿命成像测量的Förster共振能量转移（FRET）实现了蛋白质-蛋白质相互作用的最高精度监测，测量需要几分钟才能获得一帧，限制了它们在动态活细胞系统中的使用。我们提出了一种衍射限制，大规模并行，时间分辨的多焦点多光子显微镜能够产生荧光寿命图像与55 ps的时间分辨率，提高了64倍的采集速度。我们目前的示范与FRET成像在一个模型细胞系统，并证明在体内FLIM使用GTdR生物传感器在斑马鱼胚胎。
Imaging the spatiotemporal interaction of proteins in vivo is essential to understanding the complexities of biological systems. The highest accuracy monitoring of protein-protein interactions is achieved using Förster resonance energy transfer (FRET) measured by fluorescence lifetime imaging, with measurements taking minutes to acquire a single frame, limiting their use in dynamic live cell systems. We present a diffraction limited, massively parallel, time-resolved multifocal multiphoton microscope capable of producing fluorescence lifetime images with 55 ps time-resolution, giving improvements in acquisition speed of a factor of 64. We present demonstrations with FRET imaging in a model cell system and demonstrate in vivo FLIM using a GTPase biosensor in the zebrafish embryo.
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DOI：
10.1073/pnas.96.5.2135
发表时间：
1999-03-02
影响因子：
11.1
作者：
Miyawaki, A;Griesbeck, O;Tsien, RY
通讯作者：
Tsien, RY
影响因子：
56.9
作者：
DENK, W;STRICKLER, JH;WEBB, WW
通讯作者：
WEBB, WW
影响因子：
3.3
作者：
Nalbant, Perihan;Chang, Yuan-Chen;Bokoch, Gary M.
通讯作者：
Bokoch, Gary M.
影响因子：
3.5
作者：
Gratton, E;Breusegem, S;Ruan, QQ
通讯作者：
Ruan, QQ