Sp1 involvement in the 4β‐phorbol 12‐myristate 13‐acetate (TPA)‐mediated increase in resistance to methotrexate in Chinese hamster ovary cells
Sp1 involvement in the 4β‐phorbol 12‐myristate 13‐acetate (TPA)‐mediated increase in resistance to methotrexate in Chinese hamster ovary cells
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Sp1参与4β-佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯（TPA）介导的中国仓鼠卵巢细胞对甲氨蝶呤耐药性的增加
DOI：
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发表时间：
2001
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
C. Ciudad
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
V. Noé;C. Alemany;M. Nicolás;C. Ciudad
4β-佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯（TPA）主要通过扩增二氢叶酸还原酶（dhfr）位点增加对甲氨蝶呤（MTX）耐药的菌落数量。我们以前表明，抑制蛋白激酶C（PKC）可以防止这种耐药性。在这里，我们研究了中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中TPA介导的MTX耐药性发展所涉及的分子变化。TPA孵育增加DHFR的表达和活性。由于Sp1控制dhfr启动子，我们确定了TPA对Sp1表达及其与DNA结合的影响。TPA孵育增加Sp1结合和Sp1蛋白水平。后者的作用是由于Sp1 mRNA的增加。去磷酸化的控制或TPA处理的细胞的核提取物减少了结合的Sp1。稳定转染的PKCα显示Sp1结合增加，并且当用MTX处理时，比对照细胞产生更多的抗性集落。75%的分离菌落显示dhfr基因拷贝数增加。瞬时表达PKCα可增加DHFR活性。Sp1的过度表达增加了对MTX的抗性，而通过光神霉素抑制Sp1结合降低了这种抗性。我们得出结论，TPA增强MTX耐药性的机制之一，主要是通过基因扩增，是通过增加Sp1的表达，导致DHFR激活。
4β-Phorbol 12-myristate 13-acetate (TPA) increases the number of colonies resistant to methotrexate (MTX), mainly by amplification of the dihydrofolate reductase (dhfr) locus. We showed previously that inhibition of protein kinase C (PKC) prevents this resistance. Here, we studied the molecular changes involved in the development of TPA-mediated MTX resistance in Chinese hamster ovary (CHO) cells. TPA incubation increased the expression and activity of DHFR. Because Sp1 controls the dhfr promoter, we determined the effect of TPA on the expression of Sp1 and its binding to DNA. TPA incubation increased Sp1 binding and the levels of Sp1 protein. The latter effect was due to an increase in Sp1 mRNA. Dephosphorylation of nuclear extracts from control or TPA-treated cells reduced the binding of Sp1. Stable transfectants of PKCα showed increased Sp1 binding, and when treated with MTX, developed a greater number of resistant colonies than control cells. Seventy-five percent of the isolated colonies showed increased copy number for the dhfr gene. Transient expression of PKCα increased DHFR activity. Over-expression of Sp1 increased resistance to MTX, and inhibition of Sp1 binding by mithramycin decreased this resistance. We conclude that one mechanism by which TPA enhances MTX resistance, mainly by gene amplification, is through an increase in Sp1 expression which leads to DHFR activation.
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DOI：
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M. Cornwell;D. Smith
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