A modular and optimized single marker system for generating Trypanosoma brucei cell lines expressing T7 RNA polymerase and the tetracycline repressor.
A modular and optimized single marker system for generating Trypanosoma brucei cell lines expressing T7 RNA polymerase and the tetracycline repressor.
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DOI：
10.1098/rsob.110037
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发表时间：
2012-02
期刊：
影响因子：
5.8
通讯作者：
Kelly S
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Poon SK;Peacock L;Gibson W;Gull K;Kelly S
在这里，我们提出了一个简单的模块化可扩展的载体系统引入T7 RNA聚合酶和四环素阻遏基因到布氏锥虫。这种新的系统利用了我们对基因表达和基因组组织的理解的发展，以产生针对引入的转基因的高水平表达而优化的流线型质粒。我们证明了这种新的系统在血流和前循环形式的布氏锥虫，包括基因组菌株TREU 927/4的效用。我们验证这些细胞系使用各种诱导实验，重新捕获以前发表的致命和非致命的表型。我们进一步证明了单一标记物（SmOx）TREU 927/4细胞系在采采蝇体内实验中的实用性，并提供了一组质粒，使全蝇和唾液腺特异性诱导表达的转基因。
Here, we present a simple modular extendable vector system for introducing the T7 RNA polymerase and tetracycline repressor genes into Trypanosoma brucei. This novel system exploits developments in our understanding of gene expression and genome organization to produce a streamlined plasmid optimized for high levels of expression of the introduced transgenes. We demonstrate the utility of this novel system in bloodstream and procyclic forms of Trypanosoma brucei, including the genome strain TREU927/4. We validate these cell lines using a variety of inducible experiments that recapture previously published lethal and non-lethal phenotypes. We further demonstrate the utility of the single marker (SmOx) TREU927/4 cell line for in vivo experiments in the tsetse fly and provide a set of plasmids that enable both whole-fly and salivary gland-specific inducible expression of transgenes.
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作者：
Wickstead, B;Ersfeld, K;Gull, K
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Horn, David