Immunocytochemical studies of pituitary hormones with PAP, ABC, and immunogold techniques: evolution of technology to best fit the antigen.
Immunocytochemical studies of pituitary hormones with PAP, ABC, and immunogold techniques: evolution of technology to best fit the antigen.
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使用 PAP、ABC 和免疫金技术对垂体激素进行免疫细胞化学研究：最适合抗原的技术演变。
DOI：
10.1002/aja.1001750214
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发表时间：
1986
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Ellison,D
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Childs,GV;Unabia,G;Ellison,D
我们实验室的免疫细胞化学技术已经发展，以满足对每种抗原更有效、更精细染色的特定需求。每一个今天使用的免疫细胞化学技术的应用的基本原理进行了描述，并给出了详细的方法。在20世纪70年代早期，人们确定过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物（PAP）染色提供了在电子显微镜水平上检测促肾上腺皮质激素（ACTH）的最灵敏方法，即使是在用传统固定和包埋技术制备的组织中，这些技术被认为对维持抗原性相当苛刻。然而，将相同的PAP复合物技术应用于更大的糖蛋白抗原，如卵泡刺激素（FSH），证明要困难得多;当应用更温和的固定包埋方案时，问题得到了部分解决。只有在20世纪80年代早期应用了抗生物素蛋白-生物素过氧化物酶复合物（ABC）染色剂，才能生产出有效、可靠的FSH染色剂。该技术还允许对所有抗原进行更有效的反应，从而可以更快速地收集形态测定数据。因此，我们得出结论，光学显微镜免疫过氧化物酶技术对于包埋前和包埋后染色的垂体细胞类型的形态计量分析是极好的。然而，需要一种更精细的染色剂在电子显微镜水平上对单个细胞器进行定量，导致了胶体金染色剂在1983-1984年的发展。这种技术，这是新的，我们的实验室，也描述和说明在本报告中。还包括我们的固定和包埋过程对激素抗原性和用于控制背景和非特异性反应的技术的影响的研究的描述。我们希望，新手将发现我们实验室技术演变的基本原理的描述有助于选择他或她自己的免疫细胞化学染色。
The immunocytochemical technology in our laboratory has evolved in response to specific needs for more efficient, refined stains for each antigen. The rationale for the application of each of the immunocytochemical techniques used today is described, and detailed methods are given. In the early 1970s, it was determined that the peroxidase‐antiperoxidase complex (PAP) stain provided the most sensitive means of detection of adrenocorticotropin (ACTH) at the electron microscope level even in tissues prepared with conventional fixation and embedding techniques that are considered rather harsh for the maintenance of antigenicity. Application of the same PAP complex technique to the larger glycoprotein antigens, like follicle‐stimulating hormone (FSH), however, proved far more difficult; and the problem was resolved partially when more gentle fixation‐embedding protocols were applied. The production of an efficient, reliable stain for FSH was achieved only with the avidin‐biotin peroxidase complex (ABC) stains were applied in the early 1980s. This technique also allowed more efficient reactions for all the antigens, and morphometric data could thereby be collected more rapidly. Thus, we concluded that the light microscope immunoperoxidase techniques were excellent for the morphometric analysis of pituitary cell types in both pre‐embedding and postembedding stains. However, the need for a more refined stain for its quantification at the electron microscope level on individual organelles led to the development of the colloidal gold stain in 1983–1984. This technique, which is new to our laboratory, is also described and illustrated in this report. Also included is a description of our studies of the effect of fixation and embedding processes on hormone antigenicity and techniques used to control background and nonspecific reactions. It is hoped that the novice will find the description of the rationale for the evolution of technology in our laboratory useful in making choices for his or her own immunocytochemical stains.
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