Multiplexing fluorogenic esterase-based viability assay with luciferase assays
Multiplexing fluorogenic esterase-based viability assay with luciferase assays
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基于荧光酯酶的活力测定与荧光素酶测定的多重分析
DOI：
10.1016/j.mex.2019.09.008
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发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
1.9
通讯作者：
Hashimoto Yuichi
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ohgane Kenji;Yoshioka Hiromasa;Hashimoto Yuichi
基于荧光素酶的报告分析是药物发现中最常见的基于细胞的筛选形式之一，同时评估受试化合物的细胞毒作用对于减少假阳性具有重要价值。在这里，我们共享一种多重检测方案，该方案允许以多孔板的形式连续测量同一样本的细胞活力(细胞数)和荧光素酶活性。活力测定采用荧光酯酶底物CytoRed。·该方法允许在单个样本中连续测量内源性酯酶活性(作为细胞数量的替代)，然后在单个样本中测定荧光素酶活性。·该方法消除了使用单独等分的裂解物进行平行活力测定或蛋白质分析的需要。·该方法尤其适用于稳定表达荧光素酶结构的细胞的分析，对于这种情况，共转染另一报告基因不是一个可行的选择。
Luciferase-based reporter assays are one of the most common cell-based screening formats for drug discovery, and simultaneous evaluation of the cytotoxic effect of test compounds is of great value in reducing false-positives. Here we share a multiplex assay protocol that allows sequential measurement of cell viability (cell number) and luciferase activity of the same sample in a multi-well-plate format. The viability assay employs a fluorogenic esterase substrate, CytoRed.•This protocol allows sequential measurement of endogenous esterase activity (as a surrogate for cell number) and then luciferase activity in a single sample.•The protocol eliminates the need for parallel viability assay or protein assay using separate aliquots of the lysate.•This protocol is especially useful for assays with cells stably expressing a luciferase construct, for which co-transfection of another reporter gene is not a viable option.
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影响因子：
--
作者：
Didiot, Marie-Cecile;Serafini, Sergio;Parker, Christian N.
通讯作者：
Parker, Christian N.
开发用于高分辨率生物发光成像的增强甲虫荧光素酶
DOI：
--
发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
--
作者：
Nakajima;Y.;Ohmiya;Y.
通讯作者：
Y.
影响因子：
3.1
作者：
Neto, A. J. Silva;Scorsato, V.;Viviani, V. R.
通讯作者：
Viviani, V. R.
影响因子：
3.3
作者：
Viviani, VR;Silva, ACR;Reinach, FC
通讯作者：
Reinach, FC
试卤灵衍生物作为细胞活力的荧光指示剂
影响因子：
1.6
作者：
M. Ishiyama;Hisako Furusawa;M. Shiga;Fumio Ohseto;K. Sasamoto
通讯作者：
K. Sasamoto