水牛 SIRT6 基因 shRNA 干扰慢病毒载体 构建与验证
水牛 SIRT6 基因 shRNA 干扰慢病毒载体 构建与验证
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DOI：
10.19556/j.0258-7033.20191015-04
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发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
邓彦飞
中科院分区：
文献类型：
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作者：
程隽如;杨素芳;崔佳瑜;石德顺;邓彦飞
本研究旨在构建 SIRT6 基因的 RNA 干扰慢病毒载体，并在水牛成纤维细胞中验证载体的有效性。设计合成 2 条特异性水牛 SIRT6 基因的 shRNA 序列，分别将其克隆至 Psi-LVRU6GP 慢病毒干扰载体上，重组质粒通过琼脂糖凝胶电泳及测序鉴定。将重组质粒与慢病毒包装载体 NRF、VSVG 共转染 293T 细胞，荧光.显微镜下检查转染效果。转染 60 h 后收集病毒悬液，并感染水牛胎儿成纤维细胞（BFF），qRT-PCR 检测干.扰效果。结果显示：成功构建了 2 个 RNA 干扰 SIRT6 基因表达的慢病毒重组质粒；经慢病毒包装感染水牛成纤维细胞后检测 SIRT6 mRNA 表达水平，干扰载体 Psi-sh1-LVRU6GP、Psi-sh2-LVRU6GP 均能有效下调SIRT6 的表达，与质粒对照组相比差异显著，Psi-sh2-LVRU6GP 的干扰效果最好。SIRT6 基因 shRNA 干扰慢病毒载体的成功构建为研究 SIRT6 基因对水牛细胞衰老的影响及其机制奠定基础。